[发明专利]一种仔猪肠道功能保护剂的筛选方法

说明书

本发明公开一种仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，包括以下步骤：将试验仔猪分为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组，使Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水、Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂；于试验第7天开始，在Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水、Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂后1h时，对Ⅰ组进行生理盐水腹腔注射，对Ⅱ组和Ⅲ组进行吲哚美辛腹腔注射；于试验第10天时，同时对Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组进行D‑木糖口腔灌服，1h后采集试验仔猪的血样并测定血液指标；血样采集2h后，取试验仔猪的小肠样品，观测肠道病理学变化，并检测肠道功能基因的mRNA水平。本发明提出的仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，具有试验周期短、针对性强、结果准确、可重复性高的优点。

技术领域

本发明涉及仔猪饲料添加剂技术领域，特别涉及一种仔猪肠道功能保护剂的筛选方法。

背景技术

肠道不仅是所有营养物质消化吸收的最终场所，也是动物体内最大的免疫器官，是机体防御体系的第一道屏障，维护动物肠道健康对保障养猪生产至关重要。研究证明，肠道是机体应激反应的中心器官，各种应激因素(如心理性、生理性、营养性和病原性的应激因子)会导致肠道功能紊乱、损伤仔猪肠道的结构与功能，导致仔猪腹泻，造成严重的经济损失。而传统饲用抗生素因耐药性和残留性问题将逐步被禁止，因此，为了改善仔猪腹泻问题，需要筛选出具有猪肠道功能保护作用的饲料添加剂。

然而，现有技术中，对于具有猪肠道功能保护作用的饲料添加剂的筛选方法十分有限，且所采用的肠道损伤模型、肠道功能衡量指标、仔猪日龄、试验周期等并不一致，易导致试验结果重复性差、所筛选的饲料添加剂应用效果不稳定、针对性不强，并不能准确、快速地筛选出适合于仔猪饲养的仔猪肠道功能保护添加剂。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，旨在提高仔猪肠道功能保护剂的筛选方法的准确性和可重复性。

为实现上述目的，本发明提出一种仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，包括以下步骤：

步骤S10、将试验仔猪分为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组，使Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水、Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂，试验连续进行6天；

步骤S20、于试验第7天开始，在Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水、Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂后1h时，对Ⅰ组进行生理盐水腹腔注射，对Ⅱ组和Ⅲ组进行吲哚美辛腹腔注射，连续进行3天；

步骤S30、于试验第10天时，对Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组的所有试验仔猪进行禁食、但不断水处理8h后，称重并计算Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪对应的平均日增重；

步骤S40、对试验仔猪称重后，同时对Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组进行D-木糖口腔灌服，1h后对应采集Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪的血样并测定血液指标；

步骤S50、血样采集2h后，对应取Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪的小肠样品，观测肠道病理学变化，并检测肠道功能基因的mRNA水平，根据试验仔猪的平均日增重、血液指标、肠道病理学变化以及肠道功能基因的mRNA水平，分析待筛选添加剂对试验仔猪肠道功能的保护效果，进而筛选出仔猪肠道功能保护剂。

优选地，在步骤S10中：

Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂的剂量为每千克体重10～50mg，每日一次；

Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水的剂量为每千克体重10～50mg，每日一次。

优选地，步骤S10包括：

步骤S11、选取健康良种仔猪于7日龄断奶，用人工乳喂养，作为试验仔猪；

步骤S12、将7日龄的试验仔猪在代谢笼中代谢适应3天后，按照体重相近原则随机分为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组，设为试验第1天并开始试验；

步骤S13、试验过程中，使Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水、Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂，试验连续进行6天。