[发明专利]一种仔猪肠道功能保护剂的筛选方法

权利要求书

1.一种仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S10、将试验仔猪分为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组，使Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水、Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂，试验连续进行6天；

步骤S20、于试验第7天开始，在Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水、Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂后1h时，对Ⅰ组进行生理盐水腹腔注射，对Ⅱ组和Ⅲ组进行吲哚美辛腹腔注射，连续进行3天；

步骤S30、于试验第10天时，对Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组的所有试验仔猪进行禁食、但不断水处理8h后，称重并计算Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪对应的平均日增重；

步骤S40、对试验仔猪称重后，同时对Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组进行D-木糖口腔灌服，1h后对应采集Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪的血样并测定血液指标；

步骤S50、血样采集2h后，对应取Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪的小肠样品，观测肠道病理学变化，并检测肠道功能基因的mRNA水平，根据试验仔猪的平均日增重、血液指标、肠道病理学变化以及肠道功能基因的mRNA水平，分析待筛选添加剂对试验仔猪肠道功能的保护效果，进而筛选出仔猪肠道功能保护剂。

2.如权利要求1所述的仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，其特征在于，在步骤S10中：

Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂的剂量为每千克体重10～50mg，每日一次；

Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水的剂量为每千克体重10～50mg，每日一次。

3.如权利要求2所述的仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，其特征在于，步骤S10包括：

步骤S11、选取健康良种仔猪于7日龄断奶，用人工乳喂养，作为试验仔猪；

步骤S12、将7日龄的试验仔猪在代谢笼中代谢适应3天后，按照体重相近原则随机分为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组，设为试验第1天并开始试验；

步骤S13、试验过程中，使Ⅰ组和Ⅱ组口腔灌服生理盐水、Ⅲ组口腔灌服待筛选添加剂，连续进行6天。

4.如权利要求1或2任意一项所述的仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，其特征在于，在步骤S20中：

Ⅱ组和Ⅲ组进行吲哚美辛腹腔注射的注射量为每千克体重5mg；

Ⅰ组进行生理盐水腹腔注射的注射量为每千克体重5mg。

5.如权利要求1所述的仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，其特征在于，在步骤S40中：D-木糖口腔灌服的剂量为每千克体重100mg。

6.如权利要求5所述的仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，其特征在于，步骤S40具体包括：

对试验仔猪称重后，同时对Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组进行D-木糖口腔灌服，1h后对应采集Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪的血样并分离血清，测定血液指标；

其中，所述血液指标包括血液中二胺氧化酶活力、以及D-木糖、肠脂肪酸结合蛋白和瓜氨酸水平。

7.如权利要求1或6任意一项所述的仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，其特征在于，步骤S50包括：

步骤S51、血样采集2h后，对所有试验仔猪进行戊巴比妥酸钠肌肉注射，使试验仔猪麻醉后，屠宰试验仔猪并对应取Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪的小肠样品；

步骤S52、将小肠样品制作为肠道组织切片，观测肠道病理学变化；同时刮取肠道黏膜样品，检测肠道功能基因的mRNA水平；

步骤S53、根据Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组试验仔猪的平均日增重、血液指标、肠道病理学变化以及肠道功能基因的mRNA水平，分析待筛选添加剂对试验仔猪肠道功能的保护效果，进而筛选出仔猪肠道功能保护剂；

其中，所述肠道功能基因包括绒毛素、肠脂肪酸结合蛋白、基质金属蛋白酶、钾离子通道以及水通道蛋白。

8.如权利要求7所述的仔猪肠道功能保护剂的筛选方法，其特征在于，在步骤S51中：戊巴比妥酸钠肌肉注射的注射量为每千克体重100mg。