[发明专利]一种猫杯状病毒荧光定量检测卡及检测方法

说明书

本发明公开了一种猫杯状病毒荧光定量检测卡及检测方法，所述荧光定量检测卡由加样槽、扫描窗及手持装置组成，所述加样槽覆盖在样品垫、结合垫及部分反应膜上方，所述扫描窗覆盖在反应膜上方，所述结合垫包被有荧光乳胶微球偶联的抗猫杯状病毒单克隆抗体，所述反应膜含有检测线及质控线，所述检测线包被有抗猫杯状病毒单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠多克隆抗体。本发明可提供定量检测结果，此外，本发明公开了一种基于定量检测结果的猫杯状病毒病情及预后判断方法。本发明可定量检测猫杯状病毒，具有灵敏度高、易操作、稳定性好等优点，可实现对临床样本的跟踪监测。

技术领域

本发明涉及一种猫杯状病毒荧光定量检测卡及检测方法，属于生物检测领域。

背景技术

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)属于杯状病毒科，疱疹病毒属，是一种单链RNA 病毒，呈正二十面体对称。可引起猫及猫科动物的口腔及呼吸道传染病，也可引起结膜炎，猫杯状病毒也被命名为猫传染性鼻-结膜炎病毒。感染该病毒后，患病动物可出现口腔溃疡、眼鼻分泌物增多、羞明、气管炎和支气管炎等症状。1957年Fastier首次分离出该病毒，此后国内科学家也从病猫中分离出该病毒。FCV基因组全长7690bp，编码3个开放阅读框(ORF)， ORF1编码非结构蛋白，ORF2编码衣壳蛋白前体，剩余的ORF3编码一种功能未知的蛋白。猫杯状病毒不仅感染猫，也可感染豹子、东北虎及非洲狮等猫科动物。猫杯状病毒单独感染一般不会致命，但如果和其他病原混合感染将会引起致死性疾病。

FCV常和其他病毒和寄生虫等混合感染，且病毒自身较容易变异，导致FCV检测较为困难。目前FCV的检测方法包括血清中和实验、琼脂扩散实验、荧光定量PCR、ELISA及胶体金等。这些检测方法需要专业的知识及专业的仪器设备，且对检测人员要求较高，得到的结果需要进行复杂的整理，耗时耗力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单、结果易呈现且不需要专业仪器设备和操作人员的猫杯状病毒荧光定量检测卡，实现对猫杯状病毒及时、快速及高灵敏度地检测。

本发明所提供的一种猫杯状病毒荧光定量检测卡，其特征在于，包括加样槽、扫描窗及手持装置，所述加样槽覆盖在样品垫、结合垫及部分反应膜上方，所述扫描窗覆盖在反应膜上方，所述结合垫包被有荧光乳胶微球偶联的抗猫杯状病毒单克隆抗体，所述反应膜含有检测线及质控线，所述检测线包被有抗猫杯状病毒单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠多克隆抗体。

所述检测卡可对样本中猫杯状病毒的含量进行定量检测，赋予其特定的AU值。

所述检测卡的待检测物为用拭子沾取的猫科动物的粪便及鼻腔、口腔、眼分泌物或血清。

所述加样槽下方样品垫、结合垫及反应膜的组装顺序为：结合垫上方2～3mm压接在反应膜下端，样品垫压接在剩余结合垫下端。

所述加样槽的形状为椭圆形，可容纳150μL液体。

所述检测线包被的抗猫杯状病毒单克隆抗体不同于结合垫上包被的荧光乳胶微球偶联的抗猫杯状病毒单克隆抗体，且检测线包被的抗猫杯状病毒单克隆抗体需要由溶解有0.5％蔗糖的硼酸缓冲溶液稀释。

所述质控线包被的羊抗鼠多克隆抗体需要由硼酸缓冲溶液稀释。

一种猫杯状病毒荧光定量检测卡的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：

(1)将荧光乳胶微球偶联的抗猫杯状病毒单克隆抗体均匀包被在结合垫上，于37℃烘箱中烘干备用；

(2)将稀释的抗猫杯状病毒单克隆抗体均匀包被在反应膜的检测线上，于37℃烘箱中烘干备用；

(3)将稀释的羊抗鼠多克隆抗体均匀包被在反应膜的检测线上，于37℃烘箱中烘干备用；

(4)将制备好的结合垫、样品垫和反应膜组装成包含加样槽、扫描窗和手持装置的检测卡。