[发明专利]一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法

说明书

本发明公开了一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：禽流感病毒细胞置于30‑40摄氏度的密封容器内，并向其中通入60‑80%含量的氧气，观察新生细胞的病变程度，提取新生细胞的病变样本，将储存的新生细胞再次置于密封的容器内，并向其中置于反应酶，形成禽流感病毒蛋白，再次向其中添加复合佐剂，采集样本，将检测无菌样本进行超声破碎，再次离心后，收集上清液，即得到禽流感病毒灭活疫苗本发明能够对病毒储放的温度实时监控，并严格控制其的存放温度，自动化控制程度高，能够增加疫苗的形成速率，该疫苗能够有效预防禽流感，适合大范围推广。

技术领域

本发明涉及禽流感疫苗制备技术领域，尤其涉及一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法。

背景技术

禽流感，全名鸟禽类流行性感冒，是由病毒引起的动物传染病，通常只感染鸟类，少见情况会感染猪。禽流感病毒高度针对特定物种，但在罕有情况下会跨越物种障碍感染人。自从1997年在香港发现人类也会感染禽流感之后，此病症引起全世界卫生组织的高度关注。2013年3月31日，我国上海市和安徽省发现3例人感染H7N9禽流感病例，其中两个抢救无效死亡。这也是全球首次发现的新亚型流感病毒，目前国内外都没有针对H7N9禽流感病毒的疫苗。随着禽流感发生的普遍性，对疫苗的研制也显得至关重要，为此，我们提出了一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法。

发明内容

本发明提出了一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

本发明提出了一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：

S1：选取含有禽流感病毒细胞，并将其保存在零下10-零下4摄氏度的无菌条件下，且储存需在真空条件下，备用；

S2：将S1中保存的禽流感病毒细胞置于30-40摄氏度的密封容器内，并向其中通入60-80%含量的氧气，使其快速繁衍，并产生出新生细胞，再次将新生细胞移动至培养基中静置，且保证培养基内的温度始终处在15-25摄氏度，并对其进行静置200-240min，此过程，需在无菌条件下进行，以避免细菌与新生细胞发生变异，从而产生不必要的影响；

S3：观察新生细胞的病变程度，待新生细胞病变达到一半以上时，缓慢去除培养基，且确保培养基清除干净，并迅速将新生细胞存放环境的温度降低至零下15-零下12摄氏度；

S4：提取S3中的新生细胞的病变样本，将样本温度升高至15-25摄氏度，并对其内部组织形态进行观察，从而判断其是否能够再次进行反应，若是达到要求，备用；

S5：将S3中储存的新生细胞再次置于密封的容器内，并向其中置于反应酶，并在30-45摄氏度的条件下进行反应，待反应酶完全被新生细胞侵入后，形成禽流感病毒蛋白，然后将其放置在5-15摄氏度的无菌环境中，备用；

S6：待S5中的禽流感病毒蛋白放置3-6h后，再次向其中添加复合佐剂，并再次将温度升高至20-30摄氏度，待其反应30-45min后，形成混合液，将混合液离心处理，去掉上清，然后将其存放在零下30-零下20摄氏度的无菌环境下；

S7：采集样本，将检测无菌样本进行超声破碎，再次离心后，收集上清液，即得到禽流感病毒灭活疫苗。

优选的，在S2中的氧气内需含有氮气、氢气以及氖气，且氧气、氮气、氢气以及氖气的摩尔质量比为10：2：0.5：0.5。

优选的，所述的培养基的选择需为新鲜的肉类，且培养基具体为鸡肉、鸭肉、鹅肉中一种或者是多种混合物。

优选的，在S5中的反应酶具体为胰酶、谷氨酰胺合成酶、DNA连接酶中的一种或者是多种混合物。

本发明还提供了一种复合佐剂，其特征在于，其原料按重量的配方如下：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸20-35份、氢氧化锌胶体10-16份、透明质酸10-16份、氢氧化铝佐剂3-6份、氨基转移酶1-4份。