[发明专利]一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：选取含有禽流感病毒细胞，并将其保存在零下10-零下4摄氏度的无菌条件下，且储存需在真空条件下，备用；

S2：将S1中保存的禽流感病毒细胞置于30-40摄氏度的密封容器内，并向其中通入60-80%含量的氧气，使其快速繁衍，并产生出新生细胞，再次将新生细胞移动至培养基中静置，且保证培养基内的温度始终处在15-25摄氏度，并对其进行静置200-240min，此过程，需在无菌条件下进行，以避免细菌与新生细胞发生变异，从而产生不必要的影响；

S3：观察新生细胞的病变程度，待新生细胞病变达到一半以上时，缓慢去除培养基，且确保培养基清除干净，并迅速将新生细胞存放环境的温度降低至零下15-零下12摄氏度；

S4：提取S3中的新生细胞的病变样本，将样本温度升高至15-25摄氏度，并对其内部组织形态进行观察，从而判断其是否能够再次进行反应，若是达到要求，备用；

S5：将S3中储存的新生细胞再次置于密封的容器内，并向其中置于反应酶，并在30-45摄氏度的条件下进行反应，待反应酶完全被新生细胞侵入后，形成禽流感病毒蛋白，然后将其放置在5-15摄氏度的无菌环境中，备用；

S6：待S5中的禽流感病毒蛋白放置3-6h后，再次向其中添加复合佐剂，并再次将温度升高至20-30摄氏度，待其反应30-45min后，形成混合液，将混合液离心处理，去掉上清，然后将其存放在零下30-零下20摄氏度的无菌环境下；

S7：采集样本，将检测无菌样本进行超声破碎，再次离心后，收集上清液，即得到禽流感病毒灭活疫苗。

2.根据权利要求1所述的一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：在S2中的氧气内需含有氮气、氢气以及氖气，且氧气、氮气、氢气以及氖气的摩尔质量比为10：2：0.5：0.5。

3.根据权利要求1所述的一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：所述的培养基的选择需为新鲜的肉类，且培养基具体为鸡肉、鸭肉、鹅肉中一种或者是多种混合物。

4.根据权利要求1所述的一种禽流感病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：在S5中的反应酶具体为胰酶、谷氨酰胺合成酶、DNA连接酶中的一种或者是多种混合物。

5.一种根据权利要求4所述的复合佐剂，其特征在于，其原料按重量的配方如下：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸20-35份、氢氧化锌胶体10-16份、透明质酸10-16份、氢氧化铝佐剂3-6份、氨基转移酶1-4份。

6.一种根据权利要求5所述的复合佐剂的制备工艺，其特征在于，具体步骤如下：

选取搅拌器，并将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、氢氧化锌胶体、透明质酸以及氢氧化铝佐剂置入搅拌器内，在100-120摄氏度的条件下进行混合搅拌，在搅拌15-20min后，再次向其中添加氨基转移酶，待其混合均匀后，静置80-110min后，再次进行混合搅拌5-8min,完成后取出，待其温度恢复至常温后，再次进行浓缩处理，完成后，即得到复合佐剂。