[发明专利]一种溶菌酶的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种溶菌酶的制备方法。

背景技术

溶菌酶是一种碱性蛋白质，其广泛分布于动物、植物和微生物中，在哺乳动物的血浆、气管、肠道、胃、肾和肝等组织细胞中均有所表达。溶菌酶由于具有抗菌性，并且无毒、副作用，可作为潜在的抗生素替代品运用于食品、生物工程、医疗和畜禽饲料等领域。

目前溶菌酶的制备方法主要有直接结晶法、离子交换法、超滤法、聚电解质沉淀法、亲和层析法等。直接结晶法的操作简便，但生产周期长、收率低，纯度和活性也低，不适合工业化生产；超滤法的操作简单，无杂质引入，但是提取方法粗放，产品质量差，且超滤膜容易堵塞；聚电解质沉淀法的生产周期长，提取过程中引入的试剂具有不安全因素，产品不适用于食品医药等领域；亲和层析法可快速的实现目的物与其他杂质的分离，但是溶液粘度大时容易造成层析柱的堵塞。目前工业生产主要采用阳离子交换法，通过阳离子树脂吸附、高盐洗脱、脱盐脱水和雾化干燥等步骤获得较为理想的收率和纯度。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种溶菌酶的制备方法，工艺简单快捷，条件温和，无需复杂设备，可以获得高纯度与高生物活性的溶菌酶，可以克服现有溶菌酶制备工艺的缺点。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种溶菌酶的制备方法，其特征在于按照以下步骤进行：

(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；

(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；

(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；

(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；

(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；

(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；

所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。

步骤(A)中所述匀质为匀质2次，匀质温度为40℃，匀质时间为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa。本发明具有以下有益技术效果：

本发明采用匀质机对鸡蛋清或全鸡蛋液的稀释液进行匀质两次，对匀质液超滤，获得的溶菌酶回收率和酶活性，均高于普通搅拌。

具体实施方式

下面结合具体实例进一步说明本发明。

实施例1

(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；

(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；

(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；

(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗

脱液；

(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；

(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。

实施例2

(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为35℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；

(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；

(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；