[发明专利]CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法及试剂盒

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体是CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法及试剂盒，CD151蛋白表达量的免疫组化试剂盒包括CD151抗体；5%BSA封闭液20mL；DAKO即用型HRP标记二抗10mL；3%H₂O₂20mL；DAB；苏木精。本发明检测方法能够快速检测血清中CD151蛋白表达量，研究显示CD151蛋白在各种肿瘤组织中高表达。提示CD151蛋白作为一种潜在的肿瘤相关标志物，可为临床快速诊断、治疗效果判断和预后判断提供参考。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法及试剂盒。

背景技术

恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康的主要疾病。我国肿瘤发生人数不断升高，死亡率从70年代的83.65/10万上升到90年代的108.26/10万，上升了29.42％。广西的恶性肿瘤死亡率也呈上升趋势，仅1996年(34700人死亡)就比1991年增加12700人，增长近57.73％；广西的恶性肿瘤死亡标化减寿率为9.88‰；广西居民一生(按出生至74岁计算)死于恶性肿瘤的风险约为1/10左右(累积危险度10.66％)；恶性肿瘤使广西人口平均期望寿命减少2.13岁。恶性肿瘤引发了沉重的社会经济负担，据估算每年用于癌症病人的医疗费用约800亿元，约占卫生总费用的20％。全国因癌症损失的失能调整生命年为185.1万人年，以此估算的经济损失高达1432.3亿元。肿瘤的早诊早治是目前预防治疗肿瘤的有效手段。

CD151是四跨膜蛋白超家族(transmembrane 4superfamily，TM4SF)中的一个成员，它能将整合素接收到的生物信号转导到细胞内的其他关键蛋白质(如激酶)，参与细胞的黏附、迁移、形成半桥粒结构等多种病理生理过程，在肿瘤细胞的迁移、侵袭和转移中起重要作用，其过表达与多种癌症的预后不良有关。研究发现，CD151是癌蛋白，在乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、结直肠癌、膀胱癌、胆囊癌等肿瘤中高表达。动物实验发现小鼠模型中敲除CD151后肿瘤发生延迟，原发性肿瘤减少。因此，CD151是肿瘤诊断和预后判断的一个标志，也是靶向治疗的一个潜在重要靶点。开展CD151蛋白的表达水平检测，有利于开展临床快速诊断、治疗效果判断和预后判断的研究和应用。

目前，国内外报道的CD151检测方法都不很成熟，而且仅用于科研实验，尚未开发

成适用于临床检测的试剂盒，不利于临床常规使用。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的上述缺陷，提供一种CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法及试剂盒。

为实现上述发明目的，本发明采用了如下技术方案：

一种CD151蛋白表达量的免疫组化试剂盒，包括CD151抗体；5％BSA封闭液20mL；DAKO即用型HRP标记二抗10mL；3％H₂O₂ 20mL；DAB；苏木精。

此外，本发明还提供如下附属技术方案：

优选地，上述CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法，包括如下步骤：

(1)制备免疫组化反应试剂和优化反应条件：CD151重组蛋白的制备与鉴定、制备单抗杂交瘤细胞-小鼠腹水模型、单抗杂交瘤-小鼠腹水CD151抗体的纯化；

(2)采用免疫组化技术对癌旁组织和肿瘤组织病理切片蛋白进行染色，检测染色浓度和染色范围；

(3)根据染色信号进行半定量评估，获得组织中CD151蛋白表达量。

优选地，上述步骤(2)中所述采用免疫组化技术对癌旁组织和肿瘤组织病理切片进行检测，具体方法为：

A、取癌旁组织和肿瘤组织进行石蜡包埋制备病理切片；

B、CD151抗体进行第一孵育；