[发明专利]保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法

权利要求书

1.保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

S1：将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，加入体积浓度为95％的乙醇，搅拌溶解，制得蜂胶乙醇液；

S2：用目数为800-1000目的滤器进行过滤蜂胶乙醇液而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液通过滤膜得精制蜂胶液，然后将精制蜂胶液减压浓缩干，得到精制蜂胶；

S3：定性分析：取精制蜂胶与去离子水进行混合溶解，配制蜂胶溶液，然后加入显色液，观察颜色变化；

S4：定量分析：通过液相色谱检测法检测精制蜂胶，通过标准品对照得到保健食品中假蜂胶的定量分析；

其中，所述滤膜的制备原料包括葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)；

所述滤膜的制备方法如下：

(1)多孔葡聚糖凝胶制备：将葡聚糖凝胶用蒸馏水浸泡24h，用蒸馏水充分洗涤至中性，过滤，置于-12～-15℃迅速冷冻5h，取出后放入冷冻干燥箱内，冷冻干燥24h，得到多孔葡聚糖凝胶；

(2)酰氯化多孔葡聚糖凝胶：在反应器加入二氯甲烷、草酰氯、多孔葡聚糖凝胶，升温至30℃，保温反应3h，反应完毕后减压浓缩干，取出后放真空干燥箱中干燥，得到酰氯化多孔葡聚糖；所述二氯甲烷与所述草酰氯、所述多孔葡聚糖凝胶的重量比为10：1：0.7；

(3)向反应器中加入乙腈、酰氯化多孔葡聚糖、八(氨基苯基三氧硅烷)，升温至80℃，保温反应14h，过滤，脱泡，得到制膜液；所述乙腈与所述酰氯化多孔葡聚糖重量比为6：1；将聚酯无纺布作为支撑层安装在刮膜机上，调整好刮刀的厚度和线速控制仪的走布速度，将制备好的制膜液缓慢平稳地倒入制膜液储存槽中，开动刮膜机，制膜液被涂刮在聚酯无纺布上，经过10cm的空气暴露距离后，浸入到6℃的恒温凝固浴中，后经过漂洗槽充分漂洗，得到滤膜。

2.根据权利要求1所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述体积浓度为95％的乙醇与所述原料蜂胶的重量比为(4-8)：1。

3.根据权利要求1所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述显色液包括缩二脲显色液、茚三酮显色液、考马斯亮蓝G250显色液中一种。

4.根据权利要求1所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述精制蜂胶与所述去离子水的重量比为1：(5-10)。

5.根据权利要求1所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：(0.05-0.2)。

6.根据权利要求5所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述滤膜的制备原料中所述葡聚糖与所述八(氨基苯基三氧硅烷)的重量比为1：0.16。

7.根据权利要求1所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述液相色谱检测法的测试参数：

色谱柱：色谱柱采用改性聚酰胺为填料；流动相：以甲醇为流动相A，以质量分数为15％的磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱：洗脱程序为：0-25min，甲醇20-40％；25-55min，甲醇40-55％；55-65min，甲醇55％；65-80min，甲醇55-75％；80-90min，甲醇75-20％；检测波长：268nm；流速：1mL/min；柱温：35℃。

8.根据权利要求7所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述改性聚酰胺为聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精。

9.根据权利要求8所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述改性聚酰胺中聚酰胺接枝七(6-氨基-6-去氧)-β-环糊精的接枝率为1-5％。

10.根据权利要求1所述保健食品中假蜂胶的定性定量分析方法，其特征在于，所述标准品至少包括芦丁、槲皮素、白杨素、高良姜素、p-香豆酸、阿魏酸中一种或多种。