[发明专利]一种免疫检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种间接法均相免疫检测试剂盒，其包括与第一标记物结合的特异性识别人免疫复合物的第一抗体以及与已知抗原相结合的受体；所述第一抗体能够特异性识别人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体的恒定区，但不识别游离的人IgG以及游离的目标抗体；游离的目标抗体能够与所述已知抗原特异性结合后被所述第一抗体识别。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体通过识别表位与人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体相结合；所述识别表位为构象表位或线性表位。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述识别表位不位于所述人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体的轻链部分。

4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述识别表位位于所述人免疫复合物中与抗原结合后的目标抗体的Fc段。

5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述识别表位的氨基酸序列包含5~10个氨基酸。

6.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体为多克隆抗体。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体的制备方法包括：用人免疫复合物对动物进行免疫，获取含有第一抗体的动物血清；然后所述动物血清经亲和层析纯化得到特异性识别人免疫复合物的第一抗体。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体的制备方法具体包括以下步骤：

S1，用第一组人免疫复合物对动物进行免疫，免疫结束后，收集动物血清；

S2，将所述动物血清上样至结合有第二组人免疫复合物的亲和层析柱上，经洗涤、洗脱后，获得含特异性识别人免疫复合物的第一抗体的洗脱液；

S3，将所述洗脱液经透析后上样至抗人IgG亲和层析柱上，穿透液中获得特异性识别人免疫复合物的第一抗体。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述结合有第二组人免疫复合物的亲和层析柱的制备方法为：将与免疫时不同的抗原固定在亲和层析柱上，然后将与所述抗原特异反应的阳性人血清上样至所述亲和层析柱上，使阳性人血清中的特异性抗体与所述抗原形成第二组人免疫复合物，获得结合有第二组人免疫复合物的亲和层析柱。

10.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，步骤S2中，所述动物血清上样前通过盐析进行粗提。

11.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述动物对人IgG免疫耐受。

12.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体为单克隆抗体。

13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体的制备方法包括：将经人免疫复合物免疫后的小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后进行培养，对细胞培养上清液进行检测，并保留阳性细胞株。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体的制备方法具体包括以下步骤：

T1，用第一组人免疫复合物对小鼠进行免疫，免疫结束后，获取小鼠的脾脏细胞；

T2，将小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后进行克隆培养，获得细胞培养上清液；

T3，利用表面结合有第二组人免疫复合物的酶标板对所述细胞培养上清液进行间接法ELISA检测，获得阳性反应克隆；

T4，将所述阳性反应克隆分别与表面结合有与步骤T3相同抗原的酶标板和表面结合有人IgG的酶标板进行间接法ELISA检测，舍弃有任意一项为阳性反应的所述阳性反应克隆；

T5，剩余的阳性反应克隆的稳定细胞株经培养或制备腹水，获得特异性识别人免疫复合物的第一抗体。