[发明专利]LDLR过表达在NK细胞过继治疗中的应用

说明书

本发明涉及LDLR过表达在抗肿瘤NK过继治疗中的应用。揭示了一种通过转基因技术增强NK细胞的抗肿瘤疗效的方法，通过在NK细胞中过表达低密度脂蛋白受体，增强NK细胞抗肿瘤活性，经过改造的NK细胞在肿瘤过继治疗中具有显著增强的疗效。此外，本发明还提供了以胆固醇处理自然杀伤细胞以增强NK细胞的抗肿瘤能力的方法。本发明为NK细胞的过继治疗提供了新的治疗策略和改进思路。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，更具体地，本发明涉及LDLR过表达在抗肿瘤NK过继治疗中的应用。

背景技术

肿瘤的免疫治疗是近年来兴起的最有前景的新疗法，该疗法借助于调节肿瘤细胞和宿主免疫反应，来增强免疫系统识别和杀伤肿瘤细胞的能力。目前肿瘤的免疫治疗可分为以下几类：(1)非特异性免疫治疗，指应用一些免疫调节剂通过非特异性地增强机体的免疫功能，激活机体的抗肿瘤免疫应答，以达到治疗肿瘤的目的。(2)免疫检查点阻断治疗，如已经被FDA批准用于恶性肿瘤治疗的抗PD1药物，以及抗CTLA-4药物等。(3)过继免疫治疗，指向将有免疫活性的自体或者同种异体的免疫细胞输给患者，为患者提供现成的免疫能力，直接杀伤肿瘤或激发机体抗瘤免疫效应，从而达到治疗恶性肿瘤的目的，为了达到更好的抗肿瘤效果，用于过继免疫疗法的免疫活性细胞必须具有较强的细胞毒活性和增殖能力。

自然杀伤细胞(Natural Killer cell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别并杀伤靶细胞，此外，NK细胞还参与骨髓移植后移植物抗白血病效应。，在体外NK细胞可杀伤某些淋巴样和髓样白血病细胞。其发挥作用的效应机制为：(1)自然杀伤活性；(2)杀伤介质主要有穿孔素，NK细胞毒因子和TNF等；(3)抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)；(4)NK细胞产生的细胞因子，发挥调节免疫和造血以及直接杀伤靶细胞的作用。NK细胞具有非专一性的细胞毒杀作用，其没有T细胞或B细胞所具有的特异性受体，不涉及进行受体的基因重组。NK细胞对靶细胞的识别和杀伤依赖于其细胞表面固定表达的激活性受体和抑制性受体，所以它能迅速识别和杀伤肿瘤细胞，并通过分泌细胞因子等招募并激活T细胞，巨噬细胞等，共同杀伤肿瘤。

目前NK细胞已被用于肿瘤免疫过继治疗，并且取得了很好的疗效，表明制备较强的细胞毒活性的NK细胞在免疫过继治疗领域有良好的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供LDLR过表达在抗肿瘤NK过继治疗中的应用。

在本发明的第一方面，提供一种提高自然杀伤(NK)细胞对于肿瘤细胞的杀伤能力的方法，包括：在自然杀伤细胞中增加低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达；或者，以胆固醇处理自然杀伤细胞。

在一个优选例中，所述的增加低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达包括：在自然杀伤细胞中重组表达外源的低密度脂蛋白受体(LDLR)；较佳地，所述的重组表达外源的低密度脂蛋白受体的方法包括：将表达构建物(如表达载体)引入到自然杀伤细胞中，所述的表达构建物带有低密度脂蛋白受体的表达盒。

在另一优选例中，所述的提高自然杀伤细胞对于肿瘤细胞的杀伤能力的方法为非治疗性的方法。

在另一优选例中，所述的在自然杀伤细胞中重组表达外源的低密度脂蛋白受体作为单独唯一的提高自然杀伤细胞对于肿瘤细胞的杀伤能力的方法。

在另一优选例中，所述的以胆固醇处理自然杀伤细胞包括：将胆固醇加入到含有自然杀伤细胞的溶液、悬浮液或培养基中。较佳地，胆固醇在溶液、悬浮液或培养基中的浓度为0.5～100ug/ml；较佳地为1～50ug/ml；更佳地为5～20ug/ml。

在另一优选例中，所述的肿瘤是能被自然杀伤细胞识别的肿瘤；较佳地，所述的肿瘤包括但不限于：白血病、黑色素瘤、肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、胆管癌、胆囊癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌。