[发明专利]获得高阳性率CAR-T细胞的方法

权利要求书

1.一种制备CAR-T细胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用由CD28抗体和该CAR-T细胞所表达的嵌合抗原受体靶向的抗原组成的组合物孵育所述CAR-T细胞的步骤，以质量计，所述抗原与CD28抗体的用量比为1：2到2：1。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原是所述CAR-T细胞表达的CAR的单链抗体特异性结合的抗原。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，以质量计，所述抗原与CD28抗体的用量比为1：1。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述嵌合抗原受体靶向如下抗原：Her2、CD19、CD20、CEA、GD2、FR、PSMA、PMEL、CA9、CD171/L1-CAM、IL-13Rα2、MART-1、ERBB2、NY-ESO-1、MAGE家族蛋白、BAGE家族蛋白、GAGE家族蛋白、AFP、MUC1、CD22、CD23、CD30、CD33、CD44v7/8、CD70、VEGFR1、VEGFR2、IL-11Rα、EGP-2、EGP-40、FBP、GD3、PSCA、FSA、PSA、HMGA2、胎儿型乙酰胆碱受体、LeY、EpCAM、间皮素、IGFR1、EGFR、EGFRvIII、ERBB3、ERBB4、CA125、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CA242、CA50、CYFRA21-1、SCC、AFU、EBV-VCA、POA、β2-MG和PROGRP。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述嵌合抗原受体靶向间皮素、EGFR、Her2、CD19或粘蛋白。

6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述CAR-T细胞经表达所述CAR的非病毒载体转染。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述非病毒载体是转座子载体。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述非病毒载体是含有选自piggybac、sleeping beauty、frog prince、Tn5或Ty的转座元件的真核表达载体。

9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）采用表达所述CAR的非病毒载体转染宿主T细胞；和

（2）转染4～8小时后使所述T细胞与所述CD28抗体和该CAR靶向的抗原孵育。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述孵育时还加入刺激因子IL-2。

11.组合物在制备CAR-T细胞中的应用，所述组合物由CD28抗体和待制备的CAR-T细胞所表达的嵌合抗原受体靶向的抗原组成，以质量计，所述抗原与CD28抗体的用量比为1：2到2：1。

12.如权利要求11所述的应用，其特征在于，所述抗原是待制备的CAR-T细胞表达的CAR的单链抗体特异性结合的抗原。

13.如权利要求11或12所述的应用，其特征在于，所述抗原选自：Her2、CD19、CD20、CEA、GD2、FR、PSMA、PMEL、CA9、CD171/L1-CAM、IL-13Rα2、MART-1、ERBB2、NY-ESO-1、MAGE家族蛋白、BAGE家族蛋白、GAGE家族蛋白、AFP、MUC1、CD22、CD23、CD30、CD33、CD44v7/8、CD70、VEGFR1、VEGFR2、IL-11Rα、EGP-2、EGP-40、FBP、GD3、PSCA、FSA、PSA、HMGA2、胎儿型乙酰胆碱受体、LeY、EpCAM、间皮素、IGFR1、EGFR、EGFRvIII、ERBB3、ERBB4、CA125、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CA242、CA50、CYFRA21-1、SCC、AFU、EBV-VCA、POA、β2-MG和PROGRP。