[发明专利]自分泌CD47抗体的EGFR特异性CAR-T细胞及其用途

说明书

本发明提供自分泌CD47抗体的EGFR特异性CAR‑T细胞及其用途。本发明的T细胞含有识别EGFR的嵌合抗原受体的编码序列和CD47抗体的编码序列；和/或表达识别EGFR的嵌合抗原受体和CD47抗体。本发明的T细胞在特异性靶向EGFR高表达的肿瘤细胞同时，可以分泌CD47抗体，消除肿瘤细胞的免疫逃逸，恢复巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，从而达到更好的抗肿瘤效果。

技术领域

本发明属于基因工程学和免疫学，涉及自分泌CD47抗体的EGFR特异性CAR-T细胞及其用途。

背景技术

癌症现在已成为人类健康的头号杀手，快速的生活节奏、巨大的工作压力、不健康的饮食习惯、糟糕的环境都是癌症发生的帮凶，使得癌症的高发率和年轻化趋势也越来越明显。目前常用的治疗手段效果十分有限，仍需探索一个更加有效的治疗方法，来提高癌症患者的生存率和生存质量。

针对恶性肿瘤的免疫治疗近年来发展迅速，取得了令人瞩目的临床疗效。自2011年，Nature及临床肿瘤最顶级杂志JCO分别发表相同题目“肿瘤免疫治疗的时代已经来临”的评论文章(Nature.2011；480(7378):480；J Clin Oncol.2011；29(36):4828)，肿瘤免疫细胞治疗迎来新一轮的研究热潮。

嵌合抗原受体T细胞疗法作为肿瘤免疫治疗的重要分支之一，在恶性血液肿瘤中已经取得了非常好的疗效，对复发难治性B细胞白血病的完全缓解率超过90％。2017年8月，美国FDA批准了诺华的tisagenlecleucel嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)治疗用于治疗儿童和年轻成年患者急性淋巴细胞性白血病(ALL)，成为第一个批准上市的CAR-T药物。紧接着同年10月，美国FDA又宣布批准了Kite Pharma的CAR-T疗法Yescarta上市，治疗罹患特定类型的大B细胞淋巴瘤成人患者。CAR-T药物的陆续获批使得CAR-T治疗迈上了一个新的台阶。

嵌合抗原受体是一种人工合成受体，它通常包含胞外抗原结合域、跨膜铰链区和胞内信号转导区。通过将识别肿瘤相关抗原(tumor associated antigen,TAA)的抗体单链可变区(single-chain fragment variable，scFv)和胞内信号域“免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs，ITAM)”在体外进行基因重组。再通过病毒或其它载体系统将其导入T细胞中，这样经过基因改造的T细胞称之为CAR-T细胞。CAR-T细胞在体外经大规模扩增后，回输到患者体内，能够以非MHC限制性的模式表现强效的抗癌作用。

但是，CAR-T细胞治疗实体瘤的疗效目前仍不足。主要原因包括：1.实体瘤异质性高，缺乏适合CAR-T治疗的细胞表面靶点。2.实体瘤具有强烈抑制免疫的微环境。

EGFR(简称为EGFR、ErbB-1或HER1)是表皮生长因子受体(HER)家族成员之一。该家族包括HER1(erbB1，EGFR)、HER2(erbB2，NEU)、HER3(erbB3)及HER4(erbB4)。HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。EGFR广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。研究表明在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达或异常表达。EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的抑制有关。EGFR的过表达在恶性肿瘤的演进中起重要作用，胶质细胞癌、肾癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等组织中都有EGFR的过表达，因此EGFR是一个很有潜力的肿瘤治疗靶点。

目前已有多种以EGFR为靶点的药物。有作用于受体胞内区的小分子络氨酸激酶抑制剂(TKI)，如吉非替尼、erlotinib、EKB-549、PKI-166、GW-2016及CI-1033。作用于受体胞外区的单克隆抗体(Mab)，如西妥昔单抗、ABX-EGF及EMD 72000等。以及其它一些免疫导治疗、基因治疗等。