[发明专利]自分泌CD47抗体的EGFR特异性CAR-T细胞及其用途

权利要求书

1.一种T细胞，所述T细胞：(1)含有识别EGFR的嵌合抗原受体的编码序列和CD47抗体的编码序列；和/或(2)表达识别EGFR的嵌合抗原受体和CD47抗体，其中，

所述CD47抗体含有CD47配体和IgG4Fc序列，所述IgG4Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第139-367位氨基酸残基所示，所述CD47配体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第21-138位氨基酸残基所示，

所述嵌合抗原受体从N端到C端依次含有：信号肽、抗EGFR的单链抗体、CD8α铰链区、CD8跨膜区、CD28胞内结构域和CD3ζ的酪氨酸活化基序，所述抗EGFR的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第23-263氨基酸残基所示。

2.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述T细胞的基因组中整合了识别EGFR的嵌合抗原受体的表达框和CD47抗体的表达框。

3.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述信号肽为CD8信号肽。

4.如权利要求3所述的T细胞，其特征在于，所述CD8信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第1-22位氨基酸残基所示。

5.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述CD8α铰链区的氨基酸序列如SEQ IDNO:1第264-318位氨基酸残基所示。

6.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第319-344位氨基酸残基所示。

7.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述CD28的胞内结构域的氨基酸序列如SEQID NO:1第345-385位氨基酸残基所示。

8.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述CD3ζ胞内信号域的氨基酸序列如SEQID NO:1第386-497位氨基酸残基所述。

9.如权利要求1中任一项所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体具有以下一项或多项特征：

所述信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:4第1-66位碱基所示；

所述单链抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO:4第67-789位碱基序列所示；

所述铰链区的核苷酸序列如SEQ ID NO:4第490-954位碱基序列所示；

所述跨膜区的核苷酸序列如SEQ ID NO:4第955-1032位碱基所示；

所述胞内共刺激信号域的核苷酸序列如SEQ ID NO:4第1033-1155位碱基所示；和

所述胞内信号域的核苷酸序列如SEQ ID NO:4第1156-1491所示。

10.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列SEQ IDNO:1第23-497位氨基酸残基所示，或如SEQ ID NO:1所示。

11.如权利要求10所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体的编码序列如SEQ IDNO:4第67-1491位碱基所示，或如SEQ ID NO:4所示。

12.如权利要求1-11中任一项所述的T细胞，其特征在于，所述CD47抗体具有以下一项或多项特征：

所述抗体还含有信号肽序列，

所述CD47抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第21-367位氨基酸序列所示，或者如SEQID NO:2所示；

所述CD47抗体的编码序列如SEQ ID NO:5第61-1101位碱基所示，或如SEQ ID NO:5所示。

13.如权利要求12所述的T细胞，其特征在于，所述信号肽为轻链信号肽。