[发明专利]稳定表达PD-1抗体的Muc1特异性CAR-T细胞及其用途

权利要求书

1.一种T细胞，其特征在于，所述T细胞：

（1）含有表达识别Muc1抗原的嵌合抗原受体的编码序列和PD-1抗体的编码序列；和/或

（2）表达识别Muc1抗原的嵌合抗原受体和PD-1抗体，

所述PD-1抗体含有抗PD-1单链抗体和IgG4Fc；其中，所述IgG4Fc的氨基酸序列如SEQID NO:1第267-495位氨基酸残基所示，所述抗PD-1单链抗体中抗体轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1第21-131位氨基酸残基所示，所述抗PD-1单链抗体中的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1第147-266位氨基酸序列所示，

所述嵌合抗原受体从N端到C端依次含有信号肽、抗Muc1近膜端的单链抗体、IgG4 FcCH2CH3铰链区、CD28跨膜区、CD28胞内结构域和CD3ζ的酪氨酸活化基序，所述Muc1近膜端的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

2.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述T细胞的基因组中整合了识别Muc1抗原的嵌合抗原受体的表达框和PD-1抗体的表达框。

3.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述信号肽为CD8信号肽。

4.如权利要求3所述的T细胞，其特征在于，所述CD8信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

5.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述IgG4 Fc CH2CH3铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。

6.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述CD28跨膜区的氨基酸序列如SEQ IDNO:9所示。

7.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述CD28的胞内结构域的氨基酸序列如SEQID NO:10所示。

8.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述CD3ζ胞内信号域的氨基酸序列如SEQID NO:12所述。

9.如权利要求1-8中任一项所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体具有以下一项或多项特征：

所述信号肽的编码序列如SEQ ID NO:14第1-66位碱基所示；

所述单链抗体的编码序列如SEQ ID NO:14第67-807位碱基所示；

所述铰链区的编码序列如SEQ ID NO:14第808-1491位所示；

所述跨膜区的编码序列如SEQ ID NO:14第1492-1575位碱基所示；

所述胞内共刺激信号域的编码序列如SEQ ID NO:14第1576-1698位碱基所示；和

所述胞内信号域的编码序列如SEQ ID NO:10第1699-2034位碱基所示。

10.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ IDNO:13第23-678位氨基酸残基所示。

11.如权利要求10所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体的编码序列如SEQ IDNO:14第70-2034位碱基所示。

12.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述PD-1抗体还含有轻链信号肽。

13.如权利要求12所述的T细胞，其特征在于，所述轻链信号肽的氨基酸序列如SEQ IDNO:1第1-20位氨基酸残基所示。

14.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述抗PD-1单链抗体的氨基酸序列如SEQID NO:1第21-266位氨基酸残基所示，或如SEQ ID NO:1所示。