[发明专利]基于光切割基序的蛋白纯化方法

权利要求书

1.一种蛋白纯化方法，所述方法包含如下步骤：

a)在宿主细胞中表达融合蛋白，所述融合蛋白包含目的肽、用于纯化的功能片段以及连接所述目的肽和所述功能片段的光切割基序；

b)使得所述融合蛋白与所述宿主细胞分离；

c)利用385nm波长的光对所述融合蛋白照射30-100min；以及

d)将所述目的肽从所述片段混合物中分离，从而获得纯化的所述目的肽，

其中，所述融合蛋白由SEQ ID NO：10所示的DNA序列编码。

2.如权利要求1所述的方法，其中，步骤a)中，所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述宿主细胞为大肠杆菌、酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母、枯草芽孢杆菌、里氏木霉、黑曲霉、昆虫或哺乳动物细胞。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述宿主细胞为大肠杆菌细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其中，所述大肠杆菌细胞选自Top10和DH10B菌株。

6.如权利要求3所述的方法，其中，所述宿主细胞为昆虫细胞。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述昆虫细胞选自细胞株Sf9、Sf21和High Five细胞。

8.如权利要求3所述的方法，其中，所述宿主细胞为哺乳动物细胞。

9.如权利要求8所述的方法，其中，所述哺乳动物细胞选自细胞株CHO和HEK293细胞。

10.如权利要求1所述的方法，其中，步骤b)中，通过对所述宿主细胞进行裂解或破碎，离心去除所述宿主细胞的裂解液或匀浆液中的可溶部分，获得包含所述融合蛋白的沉淀部分，从而使得所述融合蛋白与所述宿主细胞分离。

11.如权利要求10所述的方法，其中，步骤d)中，通过离心或膜过滤，去除经步骤c)照射后的所述片段混合物中包含所述功能片段的部分，获得纯化的所述目的肽。

12.如权利要求1所述的方法，其中，所述方法包含如下步骤：

a)在宿主细胞中表达融合蛋白，所述融合蛋白包含目的肽、用于纯化的功能片段以及连接所述目的肽和所述功能片段的光切割基序；

b)利用匀浆装置破碎宿主细胞，离心去除所述宿主细胞的匀浆液的可溶部分，获得包含所述融合蛋白的沉淀部分；

c)利用385nm波长的光对所述融合蛋白照射80-100min，使得所述光切割基序断裂，得到片段混合物；以及

d)离心或过膜，去除经步骤c)照射后的片段混合物中包含所述功能片段的部分，获得纯化的所述目的肽。

13.如权利要求1所述的方法，其中，步骤b)中，通过将所述宿主细胞裂解或破碎，对所述宿主细胞的裂解液或匀浆液进行亲和层析，并在亲和层析后对所述融合蛋白进行脱盐，使得所述融合蛋白与所述宿主细胞分离。

14.如权利要求13所述的方法，其中，步骤d)中，利用所述用于纯化的功能片段对包含经步骤c)照射后的片段混合物进行亲和层析，并在亲和层析后对所述目的肽进行脱盐，获得纯化的所述目的肽。