[发明专利]一种水溶肥料中游离氨基酸的检测方法

说明书

本发明公开一种水溶肥料中游离氨基酸的检测方法，包括以下步骤：（1）制备还原性茚三酮；（2）配置显色剂：利用茚三酮和还原性茚三酮配制显色剂；（3）制作标准曲线：取氨基酸标准溶液加入具塞试管中，分别补加水至2.0mL，然后分别加入显色剂3.0mL、缓冲溶液2.5mL，在沸水浴中反应20min，取出后在冰水浴中冷却10min，用85%乙醇溶液定容至10mL，用分光光度计检测在570nm处的吸光度，以氨基酸浓度为X值，吸光度为Y值，制作标准曲线；（4）样品检测：将待测样品用水稀释，取2.0mL，按照标准曲线的制作方法，测定吸光度。本发明提供的方法，操作简单，准确度高，重复性好，回收率在100%左右。

技术领域

本发明属于氨基酸检测技术领域，具体涉及一种水溶肥料中游离氨基酸的检测方法。

背景技术

氨基酸是一种动植物体内非常重要的组成部分，我国作为农业大国，这几年新型肥料大规模研制销售，氨基酸肥料作为一种高效，高利用率的肥料每年生产几百万吨，用于国内农业生产以及出口欧美等国。氨基酸水溶肥料中氨基酸具有改善土壤环境，增强植物果实口感、促进植物对营养元素吸收的优点，国家对于氨基酸水溶肥料的产品有明确标准（NY 1429-2010），因此检测氨基酸含量的多少是评价氨基酸水溶肥料的重要指标。

传统的实验室测定氨基酸含量方法主要为两种，一种是氨基酸自动分析仪，一种为柱前衍生-液相色谱仪法测定氨基酸含量，这两种方法具备测定所有氨基酸种类和含量的特点，但是这两种方法都具备测定样品前处理时间长，衍生物稳定性差，所需仪器昂贵的特点，检测人员技术能力要求较高，检测成本高，对于大部分氨基酸生产厂家来说，往往不具备这样的条件。

现有在实验室中，经常使用紫外法检测氨基酸含量，紫外检测氨基酸含量具有简单快捷的特点。比如，中国专利CN 103989733 A公开了鸡骨草中游离氨基酸的提取方法，并对其进行了检测，使用紫外分光光度计，以茚三酮溶液为显色剂进行氨基酸检测，但是标准曲线的相关系数较小，一般只能达到0.95左右，影响检测结果的准确性。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明旨在提供一种紫外法检测游离氨基酸的方法，结果可靠，准确性高。

氨基酸肥料厂家基本上都以酱油发酵液作为肥料氨基酸的主要来，发酵液中的游离氨基酸主要包括谷氨酸，甘氨酸等八种氨基酸，其中以谷氨酸和甘氨酸比例最高，所以，本发明以谷氨酸与甘氨酸的混合物作为标准，来衡量氨基酸肥料中的总游离氨基酸。

一种水溶肥料中游离氨基酸的检测方法，包括以下步骤：

（1）制备还原性茚三酮：将按照料液比1:25将茚三酮加入水中，在100℃下加热溶解，得到黄色溶液A；按照料液比1:50将维生素C溶于50℃的水中，得到维生素溶液；按照体积比2:1将所述维生素C溶液滴加至所述黄色溶液A中，边滴加边搅拌，持续15min，冷却至4℃后静置0.5h，用水洗涤3次后过滤，烘干，即得到还原性茚三酮；

（2）配置显色剂：按照质量比4:1将茚三酮和还原性茚三酮混合，加入95%的乙醇溶液中，得到质量浓度为2%的溶液，然后在4℃下静置12h，得到显色剂；

（3）制作标准曲线：分别取0、0.5、1.0、1.5、2.0mL的0.5mg/mL的氨基酸标准溶液，加入具塞试管中，分别补加水至2.0mL，然后分别加入显色剂3.0mL、缓冲溶液2.5mL，在沸水浴中反应20min，取出后在冰水浴中冷却10min，用85%乙醇溶液定容至10mL，然后用分光光度计检测在570nm处的吸光度，并在20min内完成检测；以氨基酸浓度为X值，吸光度为Y值，制作标准曲线；

（4）样品检测：将待测样品用水稀释，取2.0mL，然后按照标准曲线的制作方法，测定其在570nm处的吸光度，然后对照标准曲线查出对应的氨基酸浓度；

其中，所述缓冲溶液为pH=6.5的磷酸二氢钾缓冲液。