[发明专利]诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法

权利要求书

1.诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、将可降解医用高分子材料与促进成骨细胞粘附和增殖的活性物复合，制备具有三维结构的薄膜；

b、对三维结构的薄膜进行表面功能化处理；

c、采用具有骨细胞粘附和增殖活性的活性物对表面功能化处理的三维结构的薄膜进行表面改性；

d、将c中表面改性后的三维结构的薄膜进行洗涤、干燥后得到用于诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的三维结构。

e、将骨髓间充质干细胞接种于步骤d中所述的三维结构中预培养4～48小时后，加入成骨诱导培养基培养，得到成骨细胞。

2.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：步骤a中所述可降解医用高分子材料包括医用级的脂肪族聚酯，聚乳酸、聚己内酯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、壳聚糖、纤维素、聚乙烯醇的一种或者几种的组合，所述促进成骨细胞粘附和增殖的活性物包括胶原、明胶，多肽、蛋白、生长因子、壳聚糖、纳米羟基磷灰石和磷酸三钙一种或者几种的组合。

3.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：所述步骤a中，采用静电纺丝法将可降解医用高分子材料与促进成骨细胞粘附和增殖的活性物复合，制备具有三维结构的薄膜。

4.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：所述步骤b中“对三维结构的薄膜进行表面功能化处理”具体为：将三维结构的薄膜放入pH值为7.5～9.0，浓度为0.1wt％～2wt％的多巴胺Tris-HCl溶液中，反应1-48h。

5.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：所述步骤c中“采用具有骨细胞粘附和增殖活性的活性物对表面功能化处理的三维结构的薄膜进行表面改性”的反应条件为：具有骨细胞粘附和增殖活性的活性物的浓度不高于10wt％，反应的温度为0～60℃，反应时间少于48h。

6.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：所述步骤b还包括：对三维结构的薄膜进行表面功能化处理之前，对步骤a中制备的清洗三维结构的薄膜进行清洗、除溶剂、干燥处理。

7.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：所述三维结构的薄膜中，所述促进成骨细胞粘附和增殖的活性物的含量为0.05wt％～20wt％。

8.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：所述促进成骨细胞粘附和增殖的活性物为胶原，所述的胶原为I型胶原，胶原浓度为1～15mg/ml，胶原的pH值为4～6.5。

9.根据权利要求8所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：步骤b中所述的胶原浓度为7～9mg/ml，pH值为5～6.5。

10.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：步骤e中所述的预培养时间为4～24小时。

11.根据权利要求1所述的诱导骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法，其特征在于：步骤e中所述的成骨诱导培养基组成主要为：地塞米松10-5～10-2mmol/L，β-甘油磷酸钠5～20mmol/L，抗坏血酸0.02～0.05mmol/L。