[发明专利]一种诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的培养基及诱导方法

说明书

本发明公开了一种诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的培养基及诱导方法。该培养基包括基础培养基和添加成分，其中，添加成分包括以下终浓度的组分：罗格列酮0.3‑0.6mmol/L、吡格列酮6‑12μmol/L、谷氨酰胺1‑3v/v％、地塞米松10‑20nmol/L、胰岛素100‑200nmol/L和人参皂苷Rg12‑6mg/L。培养方法是采用上述细胞培养基诱导培养羊膜间充质干细胞，获得脂肪细胞。本发明提供的培养基中，各组分安全无毒、配伍科学合理，协同增效，可促进间充质干细胞向成脂细胞分化，可大大缩短分化时间，提高分化效率。

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的培养基及诱导方法。

背景技术

间充质干细胞是来源于中胚层的多能干细胞，具有高度自我更新能力和多项分化潜能。目前已在多种如羊膜、骨髓、脐带、肌肉组织、脂肪组织、脐血和牙髓等成熟组织中成功分离并培养出间充质干细胞。羊膜是胎盘包裹胎儿面的一层半透明膜，其表面没有神经、血管、肌肉和淋巴等组织，可从中分离出羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞。早在50多年前，科学家和临床医生们就已经认识到羊膜拥有一定的生物学作用。早期羊膜曾被用作覆盖皮肤伤口的敷料，可以抗感染、减轻炎症的发生，并且抑制细胞的免疫反应，还可以刺激血管的生成，这些特点使它在多种疾病的辅助治疗中得到了较为广泛的应用。

人胎盘羊膜来源的间充质干细胞(hAMSCs)来自于原条期的胚外中胚层，在一定条件下具有向多个细胞系分化的潜能，向内胚层分化，如肝细胞、胰岛样细胞；向中胚层分化，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞；向外胚层分化，如神经细胞等。人胎盘羊膜来源的间充质干细胞不仅具有干细胞的特征，还有不排斥性及免疫效果，是细胞移植和组织工程的理想种子细胞。

脂肪细胞应用于美容修复软组织缺损具有可塑性强，可适应不同缺损形状的优势，人胎盘羊膜来源的间充质干细胞的成脂诱导潜能，可使其成为美容修复软组织缺损的干细胞来源。因此，人胎盘羊膜来源的间充质干细胞的成脂分化是目前再生医学和组织工程领域的研究热点之一，脂肪组织再生技术是重建和修复由老化和病理因素等导致的脂肪组织丢失和损伤的重要技术手段，脂肪细胞作为脂肪再生工程的种子细胞来源，可大大地驱动新生组织的重建。因此，研发一种新型的诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的方法，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的培养基及诱导方法，其分化效果好，分化周期短。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的培养基，包括基础培养基和添加成分，其中，添加成分包括以下终浓度的组分：罗格列酮0.3-0.6mmol/L、吡格列酮6-12μmol/L、谷氨酰胺1-3v/v％、地塞米松10-20nmol/L、胰岛素100-200nmol/L和人参皂苷Rg12-6mg/L。

进一步地，添加成分包括以下终浓度的组分：罗格列酮0.5mmol/L、吡格列酮10μmol/L、谷氨酰胺2v/v％、地塞米松15nmol/L、胰岛素150nmol/L和人参皂苷Rg15mg/L。

进一步地，基础培养基为DMEM-H。

进一步地，基础培养基中还包括0.5-1％青霉素和0.5-1％链霉素。

采用上述培养基诱导培养羊膜间充质干细胞，所用羊膜间充质干细胞为第三代至第五代羊膜间充质干细胞，接种密度为2-8×10⁴个/mL，诱导培养条件为37℃，5％CO₂，培养时间为13-18天。

本发明提供的诱导羊膜间充质干细胞成脂分化的培养基及诱导方法，具有以下有益效果：