[发明专利]一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法

说明书

本发明公开了一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，包括外植体选择步骤、外植体消毒步骤、播种步骤、继代培养步骤、生根培养步骤和炼苗、驯化移栽步骤。本发明的方法能够有效的提高玫瑰石斛种苗的繁育的速度及繁育数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现玫瑰石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。

技术领域

本发明涉及组织培养育苗领域，尤其涉及一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法。

背景技术

玫瑰石斛(Dendrobium crepidatumLindl.ex Paxt.)为兰科，主要分布在中国、印度、尼泊尔、不丹、缅甸、泰国、老挝、越南。茎悬垂，肉质状肥厚，青绿色，圆柱形，不分枝，具多节；总状花序很短，从落了叶的老茎上发出，具有1-4朵花，花瓣质地厚，开展，萼片和花瓣白色，中上部淡紫色，唇瓣中部以上淡紫红色，中部以下金黄色，花期3-4月。

目前国内市场上的玫瑰石斛主要靠野生采挖，有少数人工栽培，一般通过分株繁殖和扦插的方式进行繁殖，繁殖种苗较少，繁殖率低，生长周期较长，正常生长环境下不经人工授粉结果的几率较小；由于果荚少，果粉细小，在自然环境下不易萌发生长等诸多因素的制约，野生的玫瑰石斛资源不断减少。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，该方法能够有效的提高玫瑰石斛种苗的繁育的速度及繁育数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现玫瑰石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种玫瑰石斛组织培养扩繁的方法，包括：

外植体选择步骤：选择玫瑰石斛母本植株，对其人工授粉，让其长出果荚，继续培育，待果荚成熟后，将其采摘保存；

外植体消毒步骤：取出果荚放入培养瓶中，先洁净果荚，然后对果荚外壳进行一次消毒1-2min，然后用无菌水冲洗3-4次，再进行二次消毒6-8min，然后用无菌水冲洗4-5次，备用；

播种步骤：将消毒后的果荚解剖开露出黄色果粉，将果粉撒到第一1/2MS培养基上，封上培养瓶的瓶盖，培养至种子萌发；

继代培养步骤：萌发的玫瑰石斛种子继续培养，玫瑰石斛种苗长到2-3cm高时称之为一级母瓶，此时将一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2MS培养基中，长至5-6cm时称为二级母瓶；

生根培养步骤：将二级母瓶转至MS培养基中，生根培养得到生根瓶苗；

炼苗、驯化移栽步骤：将生根瓶苗培养85-95天，再将其移到避免强光直射的室外环境中，放置15-30天，再打开培养瓶的瓶盖放置3-5天后，用多菌灵稀释液浸泡玫瑰石斛苗根部，洗净阴干水分，将其移栽到基质中驯化。

进一步地，外植体选择步骤中，选择玫瑰石斛2-4年的母本植株，在玫瑰石斛开花期间对其人工授粉，让其长出果荚，继续培育3-4个月，待果荚成熟后，将其采摘放置在3-7℃的环境下保存1-3周。

进一步地，外植体消毒步骤中，洁净果荚的具体步骤为，先将果荚用洗洁精水浸泡15-20min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗10-15min，然后将果荚用浓度75％医用酒精浸泡30-60s，无菌水冲洗3-4次，再进行消毒；用浓度为1-3％的次氯酸钠进行一次消毒，用浓度为0.1-0.3％的氯化汞进行二次消毒。