[发明专利]检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法

权利要求书

1.一种检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法，其特征在于，包括：

(1)提取：

称取样品4～6克，置于50毫升离心管中，加入20毫升乙酸乙酯，振荡提取10分钟，8000r/min离心10分钟，分离得到上清液和残渣，将所述上清液倒入蒸发瓶中，在所述残渣中加入20毫升乙酸乙酯，重复提取一次，离心，合并两次提取液。

(2)净化：

(2-1)将所述提取液于40℃以下旋转浓缩至近干，用6毫升0.1mol/L盐酸溶液溶解残渣后转移至15毫升离心管中，加入5.0毫升正己烷，漩涡振荡萃取脱脂，弃去上层正己烷层，重复萃取一次，取下层液备用。

(2-2)预先依次用3毫升甲醇和2毫升0.1mol/L盐酸溶液活化固相萃取小柱，将所述下层液上柱；再用1.0毫升0.1mol/L盐酸溶液、1毫升甲醇、1毫升甲醇-水溶液(1:9，v/v)淋洗所述固相萃取小柱，抽干；最后用6.0毫升5％氨化甲醇溶液洗脱所述固相萃取小柱，收集洗脱液，于40℃氮气吹干，用流动相定容至1.0毫升，经0.22μm微孔有机滤膜过滤，得到待测液。

(3)测定：

分别对所述待测液以及等体积的标准品溶液进行液相色谱检测，并基于检测结果确定所述硝基咪唑类抗菌药残留量，

其中，所述液相色谱检测条件如下：

1)色谱柱：Venusil XBP C18，250×4.6mm，5μm；

2)柱温：32℃；

3)流动相：乙酸缓冲液和乙腈，体积比为86：14；

4)流速：1.0mL/min；

5)进样量：30μL；

6)波长：320nm。

2.一种检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法，其特征在于，包括：

利用乙酸乙酯对牛奶进行提取处理，以便得到提取液；

将所述提取液进行净化处理，以便得到净化液；以及

将所述净化液进行液相色谱检测，以便确定所述牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，基于1克所述牛奶，所述乙酸乙酯的用量为5～10毫升。

4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述提取处理包括：

将所述牛奶与部分所述乙酸乙酯进行混合处理，并将所得到的混合液进行离心处理，收集第一上清液；

将所述上清液与剩余部分所述乙酸乙酯进行混合处理，并将所得到的混合液进行离心处理，收集第二上清液；以及

将所述第一上清液和第二上清液合并，以便得到所述提取液。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述混合处理时间为8～10分钟，所述离心处理是在6000～10000r/min下进行8～10分钟。

6.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述净化处理包括：

将所述提取液进行浓缩，并用盐酸溶液将所得到的浓缩物进行溶解，以便得到溶解液；

利用正己烷对所述溶解液进行混合及离心处理，收集下层液；以及

将所述下层液进行固相萃取处理，以便得到所述净化液。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述盐酸溶液的浓度为0.1～0.2mol/L，用量为5～8毫升。

8.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述固相萃取处理包括：

预先依次用3毫升甲醇和2毫升0.1mol/L盐酸溶液活化固相萃取小柱，将所述下层液上柱；再依次用1.0毫升0.1mol/L盐酸溶液、1毫升甲醇、1毫升体积比为1:9的甲醇-水溶液淋洗所述固相萃取小柱，抽干；最后用6.0毫升5体积％氨化甲醇溶液洗脱所述固相萃取小柱，收集洗脱液，于40℃氮气吹干，用所述液相色谱的流动相定容至1.0毫升，经0.22μm微孔有机滤膜过滤，以便得到所述净化液。