[发明专利]一种利用里氏木霉作为宿主表达重组蛋白的方法

权利要求书

1.一种利用里氏木霉作为宿主表达重组蛋白的方法，包括如下步骤：将含有待表达的目的蛋白的编码基因的表达盒克隆到里氏木霉基因组中cel3c基因的5’UTR区域；

所述“将含有待表达的目的蛋白的编码基因的表达盒克隆到里氏木霉基因组中cel3c基因的5’UTR区域”为将所述含有待表达的目的蛋白的编码基因的表达盒取代所述里氏木霉基因组中SEQ ID No.1的第141到第164位。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含有待表达的目的蛋白的编码基因的表达盒自5’端到3’端依次包含启动子、由所述启动子启动表达的所述待表达的目的蛋白的编码基因，以及终止子。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述启动子为来源于里氏木霉的纤维二糖水解酶I基因的启动子；所述终止子为来源于里氏木霉的纤维二糖水解酶I基因的终止子或来源于里氏木霉的纤维二糖水解酶II基因的终止子。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述来源于里氏木霉的纤维二糖水解酶I基因的启动子的序列为SEQ ID No.2的第1-2078位或SEQ ID No.3的第1999-4076位；所述来源于里氏木霉的纤维二糖水解酶I基因的终止子的序列为SEQ ID No.2的第3685-5927位；所述来源于里氏木霉的纤维二糖水解酶II基因的终止子的序列为SEQ ID No. 3的第5753-7844位。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述待表达的目的蛋白为来源于真核生物或原核生物的蛋白。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述“将含有待表达的目的蛋白的编码基因的表达盒克隆到里氏木霉基因组中cel3c基因的5’UTR区域”是通过向里氏木霉宿主菌中导入重组表达载体实现的；所述重组表达载体上含有所述表达盒，以及位于所述表达盒上下游用于定点插入或替换的同源臂。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述同源臂为SEQ ID No.3的第1-1998位和第7845-9768位所示的两段DNA片段。