[发明专利]一种抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y的靶点及其应用

说明书

本发明属生物医药技术领域，提供一种抑制神经母细胞瘤SH‑SY5Y的靶点，ARL8A基因和/或其参与的自噬途径。ARL8A基因和/或其参与的自噬途径的抑制剂包括：抗ARL8A的抗体、针对ARL8A编码序列的RNA干扰分子或反义寡核苷酸、ARL8A介导的自噬途径抑制剂。RNA干扰分子为定向干扰SH‑SY5Y细胞中ARL8A基因表达的siRNA分子，为ARL8A‑homo‑698。特异性的降解ARL8A基因的mRNA，干扰转录后翻译过程，诱导神经母细胞瘤细胞凋亡，达到抑制肿瘤的作用。对开发新的抗神经胶质瘤药物具有重要指导作用，用于开发制备抗肿瘤药物，对神经胶质瘤的治疗有重大应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y的靶点及其应用。

背景技术

Gie2又称 ARL8A (ADP-ribosylation factor like protein 8A)或ARL10B(ADP-ribosylation factor like protein 10B)是与溶酶体结合来调控细胞自噬的小G蛋白，和另一个小G蛋白Gie1 又称ARL8B (ADP-ribosylation factor like protein 8B) 或ARL10C （ADP-ribosylation factor like protein 10C)的结构高度相似。以下采用ARL8A和ARL10B分别命名这两个蛋白质。正常生理条件下，在全身各器官内这两个蛋白都有表达，在已知的大多数肿瘤细胞内这两个蛋白质也都有表达。2011年《Nature Cell Biology》杂志报道了Hela细胞内ARL8A和ARL8B的功能，当细胞处于营养充足的环境中，二者呈现一定的表达水平，对应的细胞状态为低自噬状态，与自噬相关的溶酶体处于细胞外周。当Hela细胞处于营养缺乏的培养环境中，二者的表达量显著降低，细胞处于高自噬水平，此时溶酶体处于细胞中央发挥自噬。这篇文献证明了ARL8A和ARL8B是Hela细胞处于抵抗饥饿诱导自噬过程中调控溶酶体迁移的关键酶，二者的功能相同。2016年《Oncotarget》杂志报道在前列腺癌细胞内ARLA几乎无表达，可认为是ARL8B单独表达型，降低ARLB表达量会促进大鼠前列腺癌细胞凋亡，证明是一个抗肿瘤药物靶点。从已知的ARLA和ARLB的研究成果来看，ARL8A也可能抗肿瘤药物作用靶点。依据ARL8A和ARL8B的表达量差异，肿瘤细胞可以分为ARL8B单独（或优势）表达型、ARL8A单独（或优势）表达型、二者共有型等三种。迄今为止尚无ARL8A单独表达（或优势）表达型的细胞报导。

神经母细胞瘤是人体神经系统常见的恶性肿瘤，尤以在婴幼儿中多发，发病率和病死率较高，预后不良，目前对于神经母细胞瘤的病因和发病机制尚未明确。人神经母细胞瘤株SH-SY5Y是来源于1970年建立的一神经母细胞瘤株患者的转移骨瘤灶细胞SK-N-SH经三次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。该细胞显示中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性，与正常多巴胺能神经细胞在功能上相似，因此广泛应用于神经系统退行性病变(如PD)的发病机制和防治措施的研究。SH-SY5Y细胞中含有凋亡相关酪氨酸激酶，在调节神经系统发育过程中发挥重要作用，能够诱导细胞分化，并且能增强其他诱导分化物的作用。如果降低SH-SY5Y细胞内基因的表达量，能导致SH-SY5Y凋亡，所采用的相关原材料和实验方法对抗神经母细胞瘤的新药研发将有很好启迪或促进作用。

RNA干扰(RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性干扰特定基因的表达，所以该技术被广泛用于探索基因功能及肿瘤基因的治疗领域。

发明内容

本发明的目的之一是提供了一种抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y的靶点，所述靶点为ARL8A基因和/或其参与的自噬途径。

本发明的另一目的是提供了一种ARL8A基因和/或其参与的自噬途径的抑制剂在降低和/或消除神经母细胞瘤SH-SY5Y药物中的应用。