[发明专利]一种生物源杀虫剂

说明书

本发明涉及植物种植领域，具体地，本发明提供一种生物源杀虫剂，所述生物源杀虫剂包含至少一种microRNA成分，更具体地，本发明提供的生物源杀虫剂包含用于控制鞘翅目昆虫害虫赤拟谷盗的microRNA，可直接用于控制鞘翅目害虫侵害植物，本发明还提供所述生物源杀虫剂的制备方法，本发明用于控制赤拟谷盗的多核苷酸片段不影响植物体内的非靶标序列的表达，本发明提供了生物杀虫剂包括一个至多个microRNA，混用可避免昆虫害虫产生抗性，本发明提供的杀虫剂具有特异性强、不杀伤有益生物、无残留、无毒副作用等优点。

技术领域

本发明涉及植物种植领域，尤其涉及一种生物源杀虫剂在植物种植中 抗虫的用途。

背景技术

microRNA(miRNA)为上世纪90年代发现的一类内源性的非编码RNA， 约22个核苷酸。它们由RNA聚合酶II(RNA polymerase II,polyII)转录， 形成长度为几百甚至上千个碱基的初级转录本(pri-miRNA)，其中 pri-miRNA的5’端具有帽子结构和poly(A)尾巴。pri-miRNA于细胞核内在 RNaseIII的作用下，被剪切生成miRNA前体(pre-miRNA)。前体miRNA 通过Ran-GTP介导的exportin-5蛋白转运到细胞质中。在RNaseIII/Dicer复 合体的作用下，pre-miRNA被剪切成两个不完全配对的miRNA和miRNA* (miRNA*就是与miRNA不完全互补配对的序列)。最后在解旋酶的作用 下miRNA/miRNA*复合体解旋形成成熟单链的miRNA。成熟的miRNA会 与沉默复合体(RISC)结合，而剩下的miRNA*在细胞质中被RNase所降 解。

到目前为止，在动植物以及病毒中已经发现有28645个miRNA分子， 大多数miRNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇(cluster)的形式存在于基因 组中，miRNAs的表达方式各不相同。部分线虫和果蝇的miRNA在各个发 育阶段的全部细胞中都有表达，而其他的miRNA则依据某种更为严谨的位 相和时相的表达模式，即在不同组织、不同发育阶段中miRNA的水平有显 著差异。

大量的研究工作表明，miRNA具有调控生物体生长和发育，细胞分化 和凋亡，激素的分泌和信号的传导以及应答各种胁迫，但是鲜有文献报道 昆虫受miRNA生长调控相关内容。本发明提供一种含有miRNA或其类似 物的杀虫剂，尤其是杀鞘翅目害虫赤拟谷盗的杀虫剂组合物，其具有特异 性强、不杀伤有益生物、无残留、无毒副作用等优点。

发明内容

为了解决上述技术问题，提高植物抗虫能力，本发明提供一种生物源 杀虫剂。

本发明是以如下技术方案实现的：本发明提供一种生物源杀虫剂，所 述生物源杀虫剂包含至少一种microRNA成分。

进一步地，所述生物源杀虫剂的制备方法为：

获得第一microRNA的前体序列、第二microRNA的前体序列，分别在 前体序列发夹结构两端约50bp处设计引物，接着以DNA为模板利用所设 引物扩增获得第一microRNA的前体序列的多核苷酸序列、第二microRNA 的前体序列的多核苷酸序列，PCR反应体系为50μl，依次加入DNA模板 1μl、10×PCRbuffer 5μl、10mM dNTPs 4μl、10μM正向引物0.8μl、 10μM反向引物0.8μl、TaKaRaTaq聚合酶0.5μl，最后加ddH2O补至50 μl，PCR反应条件为预变性94℃5min，变性94℃30s，退火59℃30s，延 伸72℃30s，30个循环，最后延伸72℃10min，4℃保存；