[发明专利]康复新液指纹图谱及其有效成分A的分离方法

权利要求书

1.一种康复新液有效成分A的分离方法，特征在于，包含以下步骤：采用高效液相色谱法对康复新液有效成分进行分离；

所述高效液相色谱法中采用的色谱柱为C₁₈柱；

所述高效液相色谱法中采用流动相A和流动相B；所述流动相A为0.06％～0.3％H₃PO₄水溶液和/或0.06％～0.3％甲酸水溶液；所述流动相B为乙腈和/或醇类溶剂；

所述康复新液有效成分A为尿嘧啶、次黄嘌呤、尿酸、腺苷、黄嘌呤、肌苷、络氨酸、苯丙氨酸和色氨酸中的两种或两种以上；

所述康复新液有效成分为包含尿嘧啶、次黄嘌呤、尿酸、腺苷、黄嘌呤、肌苷、络氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的混合物。

2.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述康复新液有效成分A为尿嘧啶、次黄嘌呤、尿酸、腺苷、黄嘌呤、肌苷、络氨酸、苯丙氨酸和色氨酸；

和/或，所述康复新液有效成分用孔径为0.22μm的微孔滤膜进行处理。

3.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述康复新液有效成分为美洲大蠊(Periploneta americana)干燥虫体的乙醇提取物。

4.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述色谱柱为Boston Luna Clone柱、Diamonsail C18柱、Agela Venusil XBP-C18柱、Acchrom Unitary-C18柱或UltimatePolar-RP柱；

和/或，所述流动相B选自甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种，例如甲醇；

和/或，所述流动相A为0.1％～0.3％H₃PO₄水溶液；所述流动相B为醇类溶剂；

和/或，所述高效液相色谱法采用等度或梯度洗脱的方式；

和/或，所述色谱柱的填料颗粒度为2.7μm～5μm；例如3μm～5μm；

和/或，所述色谱柱的长度为100mm～250mm，例如150mm；

和/或，所述高效液相色谱法中的高效液相色谱仪为Agilent1260高效液相色谱仪；

和/或，所述高效液相色谱法中的柱温为20～40℃，例如30℃；

和/或，所述的流动相的流速为0.3～1.2mL/min，例如0.4～0.5mL/min。

5.如权利要求4所述的分离方法，其特征在于，所述梯度洗脱时所述流动相A与所述流动相B的体积比为95:5～30:70；优选地，所述梯度洗脱时所述流动相A与所述流动相B的体积比为95:5～65:35；例如，所述流动相比例随时间的变化范围如表1所示：

表1

6.一种康复新液有效成分A的分析方法，其特征在于，包含以下步骤，将如权利要求1～5任一项中所述的高效液相色谱法与检测器联用对康复新液有效成分进行检测，即可，所述康复新液有效成分A为如权利要求1或2中所述康复新液有效成分A。

7.如权利要求6所述的分析方法，其特征在于，所述检测器为DAD检测器。

8.如权利要求7所述的分析方法，其特征在于，所述DAD检测器的检测波长为210nm～254nm；例如，当采用如采用权利要求5中所述的表1中所示的梯度洗脱方式时，洗脱时间为0～16min时，所述检测波长为254nm；洗脱时间为17～26min时，所述检测波长为230nm；洗脱时间为27～50min时，所述检测波长为214nm。

9.一种采用如权利要求6或7所述的分析方法对康复新液有效成分A进行含量测定的方法，其特征在于，包含以下步骤：将已知浓度的对照品和康复新液通过所述分析方法进行峰面积的获得，然后采用外标法或内标法即可计算得到所述康复新液各有效成分的含量，所述康复新液有效成分A为如权利要求1或2中所述康复新液有效成分A。

10.一种康复新液的指纹图谱，其特征在于，包含12个共有指纹峰，参照峰为苯丙氨酸色谱峰，12个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.36±0.01min，2号峰0.43±0.01min，3号峰0.47±0.01min，4号峰0.51±0.01min，5号峰0.59±0.01min，6号峰0.63±0.01min，7号峰0.86±0.02min，8号峰1.25±0.02min，9号峰1.49±0.02min，10号峰1.71±0.02min，和11号峰1.79±0.02min，其中，峰面积的比值为峰号1：峰号2：峰号6：峰号7：峰号8：峰号9：峰号10＝(0.93～1.04)：(0.84～1.06)：(0.61～0.65)：(0.88～0.91)：1.00：(1.02～1.06)：(1.017～1.18)；

所述康复新液指纹图谱是通过采用高效液相色谱法对康复新液进行测定得到的：所述高效液相色谱法中，色谱柱为Boston Luna Clone，其规格为4.6mm×250mm×5μm；流动相是以0.1％H₃PO₄为流动相A，以甲醇为流动相B，采用梯度洗脱程序，流速:0.5ml/min，检测波长：0～16min为254nm，17～26min为230nm，27～50min为215nm，柱温：30℃；所述梯度洗脱程序见表8：

表8