[发明专利]一种抑制PCSK9基因表达的siRNA分子及其应用

说明书

本发明涉及一种抑制PCSK9基因表达的siRNA分子及其药物组合物，以及使用所述siRNA分子或其药物组合物降低PCSK9基因表达水平的方法。该siRNA分子可用于治疗和/或预防PCSK9基因介导的疾病，包括心血管疾病和肿瘤性疾病。

技术领域

本发明涉及生物医药领域。具体而言，本发明涉及通过RNA干扰技术抑制PCSK9基因表达的siRNA分子及其应用。

发明背景

RNA干扰(RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。RNAi广泛存在于自然界的物种中。Andrew Fire和Craig Mello等人1998年在线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)中首次发现RNAi现象。Tuschl和PhilSharp等人2001年证实在哺乳动物中也存在RNAi。在这之后，关于RNAi的机制原理、基因功能和临床应用等研究取得了一系列的进展。RNAi在防御病毒感染、防止转座子跳跃等多种机体保护机制中发挥关键作用(Hutvágner et al.,2001；Elbashir et al.,2001；Zamore,2001)。基于RNAi机制开发的产品是具有广阔前景的候选药物。

小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)能够发挥RNA干扰作用。Elbashir等人在2001年发现siRNAs抑制哺乳动物细胞中特异基因的沉默。研究表明，siRNA与序列互补的靶mRNA特异性结合，并使其降解。长片段的双链RNA被Dicer酶切割成短片段RNA。siRNA分子由两条链组成，其中两条链中同靶mRNA结合的链称为反义链或引导链，另一条链称为正义链或过客链。研究发现，体外化学合成的siRNA进入细胞后也同样能够发挥RNA干扰作用，而且有效降低了长链RNA引起的免疫反应。因此，siRNA成为RNAi的主要工具。

枯草溶菌素前蛋白转化酶9(Proprotein convertase subtilisin/kexintype 9，PCSK9)是枯草溶菌素丝氨酸蛋白酶家族的成员，其参与调节低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白的水平。肝脏是表达PCSK9的主要部位。其他表达PCSK9的重要部位包括胰腺、肾脏以及肠。低密度脂蛋白受体(LDLR)通过清除血液中的低密度脂蛋白(LDL)预防动脉粥样硬化和高胆固醇血症。过表达研究显示，PCSK9可以控制LDLR的水平。同时，研究发现：小鼠中PCSK9基因敲除后，血中胆固醇水平降低，以及表现出对他汀类药物在降低血液胆固醇中增强的敏感性。以上研究显示，PCSK9的抑制剂对于血液中LDL-C(低密度脂蛋白-胆固醇)浓度的降低，以及对治疗PCSK9介导的疾病可能是有益的。

目前已有报道靶向PCSK9的抑制剂，以及将其用于治疗血脂类疾病的用途，但仍需开发针对该靶点的其它抑制剂，使其具有更好的疗效、特异性、稳定性、靶向性或耐受性等。

发明内容

本申请提供一种抑制PCSK9基因表达的siRNA分子、试剂盒及其药物组合物，以及上述分子、试剂盒或药物组合物在抑制或降低PCSK9基因表达或治疗PCSK9基因介导的疾病或症状的方法和用途。

具体而言，本申请涉及以下项所述的发明。

[1]一种抑制PCSK9基因表达的siRNA分子，包含互补形成双链的正义链和反义链，

其中所述正义链和/或反义链包含15-27个核苷酸或由15-27个核苷酸组成，并且所述反义链与SEQ ID NO:1的至少15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个或25个连续的核苷酸互补；

并且，

其中所述siRNA分子中的至少一个核苷酸经过修饰。