[发明专利]一种检测PD-1抗体血药浓度的方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测PD‑1抗体血药浓度的方法及试剂盒。所述方法包括通过采用生物素标记的PD‑1中和性抗体和待测样品中的PD‑1抗体竞争，采用竞争ELISA方法检测PD‑1抗体浓度。其中生物素标记的PD‑1中和性抗体与血清中的PD‑1抗体竞争结合酶标板固定的抗原，使用辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素作为检测抗体，检测生物素标记的PD‑1中和性抗体，从而对血清中的PD‑1抗体进行定量。本发明的方法具有良好的灵敏度、精密度、反复冻融稳定性、室温保存稳定性、特异性等优点，有益于形成商品化的试剂盒。该试剂盒具有低背景，良好的精密度、批间一致性、稳定性等优点。

技术领域

本发明是关于一种检测PD-1抗体血药浓度的方法及试剂盒，具体地说，是关于一种测定血清中PD-1抗体浓度的酶联免疫吸附测定法(ELISA)以及所用的试剂盒。

背景技术

近年来，基于免疫检查点蛋白如程序性细胞凋亡蛋白-1(PD-1)及其配体(PD-L1/L2)设计的单抗药物作为抑制肿瘤重要的免疫调控策略被广泛采用。目前FDA批准的针对PD-1靶点的单克隆抗体药物有默沙东Keytruda(pembrolizumab)和百时美施贵宝Opdivo(nivolumab)，但尚未在我国上市。另外，抗PD-1相关单抗药物国内也有多个制药厂在申报，但目前PD-1单抗药物的临床研究由多家申办单位发起，临床资源相对分散，未能形成完善的整合、分享机制；而且PD-1抗体血药浓度检测大多基于科学研究范畴选取一致性病例进行，在实际临床应用时无法对病人的个体化用药予以指导。

其中PD-1抗体序列参考百时美施贵宝Opdivo(nivolumab)相关专利WO2013173223A1和默沙东Keytruda(pembrolizumab)相关专利US2012135408A1。

单抗药物在相关动物中进行的药代动力学试验(吸收、蓄积、分布和消除)能为预测安全范围提供重要信息。靶向性分布是单抗药代动力学研究的关键，以靶组织浓度高于非靶组织浓度表示靶向性。另外，血液和靶点浓度的持续时间，血中抗体浓度与药物作用关系，血中抗体有效浓度、抗抗体的产生与毒性的关系，药物间相互作用等，也是临床前动物药代动力学研究的重点(苗玉发,李波等。单克隆抗体药物临床前安全性评价中的几个问题。《中国药事》，2008；22(6)：454-457)。