[发明专利]一种检测PD-1抗体血药浓度的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种非诊断目的的定量检测PD-1抗体血药浓度的方法，该方法包括：

用经过生物素标记的PD-1中和性抗体和待测血清样品中的PD-1抗体竞争，采用ELISA法以辣根过氧化酶标记的链霉亲和素为检测抗体检测血清中PD-1抗体浓度；所述的血清为人血清；

其中，所述ELISA操作步骤：

用1μg/ml的抗原PD-1包被酶标板，每孔100μl；4℃放置过夜；

封闭后加入标准品、质控样品、待检样品及等体积混匀的经过生物素标记的PD-1中和性抗体，其中经过生物素标记的PD-1中和性抗体0.002 μg/ml，其中血清终浓度为10%，孵育1小时后洗板，加入100μl 以辣根过氧化酶标记的链霉亲和素，以辣根过氧化酶标记的链霉亲和素使用比例1:10000，孵育1小时；

显色；

用酶标仪测定450nm吸收度；

以浓度与对应的百分比建立曲线，采用四参数曲线进行拟合计算；

其中，经过生物素标记的PD-1中和性抗体是按照以下方法得到的：配制含有PD-1中和抗体和生物素的混合溶液，且加入EDC、NHS，经反应得到生物素标记的中和抗体；其中，将抗体浓度控制到0.5-1 mg/ml之间，分别按照以下摩尔比例将下列标记试剂混合，抗体：生物素：EDC:NHS =1:10~20: 100~150 : 200~300 ；25~30℃，反应12~18小时，得到生物素标记的中和抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述ELISA法为竞争ELISA法。

3. 根据权利要求1所述的方法，该方法的血药浓度检测范围为5-0.0625 μg/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述中和抗体的生物素标记采用化学标记的方法。

5. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述中和抗体的生物素标记方法中，反应结束时，最终加入Tris至终浓度100 mM，终止反应；然后用G-25脱盐柱进行脱盐，进行无菌过滤，得到生物素标记的中和抗体。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述链霉亲和素的标记方法采用化学标记。