[发明专利]测定埃博霉素B的方法

说明书

本发明公开了测定埃博霉素B的方法，包括：步骤一、制备样品溶液；步骤二、设置超高效液相色谱分析条件，包括：流动相A为0.1～0.5％(V/V)甲酸的水溶液，流动相B为甲醇或乙腈；采用键合相色谱柱；采用梯度洗脱的方式；步骤三、设置飞行时间串联质谱分析条件，包括：采用ESI电离方式；扫描方式选择离子监测；监测离子m/z 508.27；运行时间14‑16min；步骤四、对一组浓度依次增加的埃博霉素B标准溶液进行测定，从而绘制出埃博霉素B的标准曲线；步骤五、对样品溶液进行测定，根据检测数据从标准曲线中计算埃博霉素B的含量。本发明15min内即可完成检测；简便易行，方法操作性强，回收率高，重现性好。

技术领域

本发明属于医药卫生和分析检测技术领域，尤其涉及一种测定埃博霉素B的方法。

背景技术

埃博霉素(epothilone)是一类大环内酯类化合物，由德国国家生物技术中心(GBF)的G.H&ouml；fle等人于1993年首次报道。从粘细菌亚目的纤维堆囊菌菌株发酵液中可以分离埃博霉素，其主要组分为埃博霉素A(Epo A)和埃博霉素B(Epo B)，分子结构：

它们具有的类似紫杉醇微管蛋白聚合和抑制微管解聚的活性使它成为了新一代抗有丝分裂药物,其作用机制与紫杉醇类药物类似,可与微管蛋白结合导致癌细胞无法顺利进行有丝分裂,进而使癌细胞产生凋亡。埃博霉素在抗肿瘤谱、抗肿瘤活性、安全性、水溶性及合成方法等方面均优于紫杉醇,有望发展成为比紫杉醇更有效的抗肿瘤药物。目前，埃博霉素同系物已经被美国食品药品管理局(FDA)批准用于治疗对紫杉醇耐药的乳腺癌。

超高效液相色谱(UPLC)技术是近年发展起来的高效分离技术，具有超高压、超高灵敏度、超高分离度等特点。飞行时间串联质谱仪(Q-TOF/MS)的特点是高灵敏度、高选择性，能得到高质量质谱图和化合物精确分子质量，UPLC与Q-TOF/MS联用技术(UPLC/Q-TOF/MS)是分析复杂和痕量物质的高效方法。

埃博霉素主要通过微生物发酵的方法获得，常用的检测方法为高效液相色谱(HPLC)分析方法，但具有分析时间长、样品用量较大、溶剂消耗量大等缺点。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了测定埃博霉素B的方法，包括：

步骤一、制备埃博霉素B样品溶液；

步骤二、设置超高效液相色谱分析条件，包括：流动相A为0.1～0.5％(V/V)甲酸的水溶液，流动相B为甲醇或乙腈；采用键合相色谱柱；采用梯度洗脱的方式；

步骤三、设置飞行时间串联质谱分析条件，包括：采用ESI电离方式；扫描方式选择离子监测；监测离子m/z 508.27；运行时间14-16min；其中，m/z 508.27为埃博霉素B的质谱峰；

步骤四、绘制标准曲线：在所述步骤二和所述步骤三给定的条件下，采用超高效液相色谱和飞行时间串联质谱对一组浓度依次增加的埃博霉素B标准溶液进行测定，从而绘制出埃博霉素B的标准曲线；

步骤五、测定样品溶液：在所述步骤三和所述步骤四给定的条件下，采用超高效液相色谱和飞行时间串联质谱对所述样品溶液进行测定，根据检测数据从所述标准曲线中计算埃博霉素B的含量。

优选的是，所述的测定埃博霉素B的方法中，所述步骤二中，制备埃博霉素A和埃博霉素B的混合对照品溶液；所述步骤三中，采用飞行时间串联质谱对所述混合对照品溶液进行测定，在所述质谱分析图中确定埃博霉素B和埃博霉素A的质谱峰，埃博霉素B的质谱峰为m/z 508.27，埃博霉素A的质谱峰为m/z 494.00。