[发明专利]测定埃博霉素B的方法

权利要求书

1.测定埃博霉素B的方法，其特征在于，包括：

步骤一、制备埃博霉素B样品溶液；

步骤二、设置超高效液相色谱分析条件，包括：流动相A为0.1～0.5％(V/V)甲酸的水溶液，流动相B为甲醇或乙腈；采用键合相色谱柱；采用梯度洗脱的方式；

步骤三、设置飞行时间串联质谱分析条件，包括：采用ESI电离方式；扫描方式选择离子监测；监测离子m/z 508.27；运行时间14-16min；其中，m/z 508.27为埃博霉素B的质谱峰；

步骤四、绘制标准曲线：在所述步骤二和所述步骤三给定的条件下，采用超高效液相色谱和飞行时间串联质谱对一组浓度依次增加的埃博霉素B标准溶液进行测定，从而绘制出埃博霉素B的标准曲线；

步骤五、测定样品溶液：在所述步骤三和所述步骤四给定的条件下，采用超高效液相色谱和飞行时间串联质谱对所述样品溶液进行测定，根据检测数据从所述标准曲线中计算埃博霉素B的含量。

2.如权利要求1所述的测定埃博霉素B的方法，其特征在于，所述步骤二中，制备埃博霉素A和埃博霉素B的混合对照品溶液；所述步骤三中，采用飞行时间串联质谱对所述混合对照品溶液进行测定，在所述质谱分析图中确定埃博霉素B和埃博霉素A的质谱峰，埃博霉素B的质谱峰为m/z 508.27，埃博霉素A的质谱峰为m/z 494.00。

3.如权利要求1所述的测定埃博霉素B的方法，其特征在于，所述步骤二中，当采用C18键合相色谱柱时，梯度洗脱程序为：0min，流动相A在流动相中的体积浓度为50-60％，流动相B在流动相中的体积浓度为40-50％，流速为0.2-0.25mL/min；3.5-12min，流动相A在流动相中的体积浓度为20-30％，流动相B在流动相中的体积浓度为70-80％，流速为0.2-0.25mL/min；12.1-16min，流动相A在流动相中的体积浓度为50-60％，流动相B在流动相中的体积浓度为40-50％，流速为0.2-0.25mL/min，其中，梯度洗脱程序中流速保持不变。

4.如权利要求1所述的测定埃博霉素B的方法，其特征在于，所述步骤二中，当采用T3键合相色谱柱时，梯度洗脱程序为：0min，流动相A在流动相中的体积浓度为90-100％，流动相B在流动相中的体积浓度为0-10％，流速为0.25-0.3mL/min；2min，流动相A在流动相中的体积浓度为55-65％，流动相B在流动相中的体积浓度为35-45％，流速为0.25-0.3mL/min；5min，流动相A在流动相中的体积浓度为35-45％，流动相B在流动相中的体积浓度为55-65％，流速为0.25-0.3mL/min；7min，流动相A在流动相中的体积浓度为25-35％，流动相B在流动相中的体积浓度为65-75％，流速为0.25-0.3mL/min；10-13min，流动相A在流动相中的体积浓度为0-10％，流动相B在流动相中的体积浓度为90-100％，流速为0.25-0.3mL/min；15min，流动相A在流动相中的体积浓度为55-65％，流动相B在流动相中的体积浓度为35-45％，流速为0.25-0.3mL/min，其中，梯度洗脱程序中流速保持不变。

5.如权利要求3或4所述的测定埃博霉素B的方法，其特征在于，所述步骤二中，所述超高效液相色谱分析条件还包括：柱温为24-30℃；所述键合相色谱柱的规格为：内径2.1mm长度50mm，填料粒径1.8-5μm。

6.如权利要求1或2所述的测定埃博霉素B的方法，其特征在于，所述步骤三中，所述飞行时间串联质谱分析条件还包括：脱溶剂管温度250℃；加热块温度200℃；雾化气为氦气，流量1.2-1.8L/min；干燥气为氦气，流量1.7-2.3L/min；检测电压1.2-1.4kV。

7.如权利要求1所述的测定埃博霉素B的方法，其特征在于，所述步骤二中，制备样品溶液，其具体过程包括：称取埃博霉素A和的对照品2-20mg，分别用甲醇溶解，配制成浓度为0.5-2.0mg/mL的埃博霉素A对照品溶液和埃博霉素B对照品溶液，分别吸取1mL，混合，配制成混合对照品溶液。