[发明专利]一种心型脂肪酸结合蛋白免疫检测试剂及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种心型脂肪酸结合蛋白均相酶免疫检测试剂，其特征在于，包括：酶标心型脂肪酸结合蛋白、用于抗检测心型脂肪酸结合蛋白抗体-酶标心型脂肪酸结合蛋白复合物的指示试剂。

2.根据权利要求1 所述的心型脂肪酸结合蛋白检测试剂，其特征在于：上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-酶标抗原偶联物由葡萄糖脱氢酶与心型脂肪酸结合蛋白偶联形成。

3.根据权利要求1 所述的心型脂肪酸结合蛋白检测试剂，其特征在于：上述指示剂选自酶试剂，所述的酶试剂由酶标偶联物和酶的底物组成，酶标偶联物为葡萄糖脱氢酶-酶标抗原偶联物，酶的底物为葡萄糖。

4.一种心型脂肪酸结合蛋白免疫检测试剂，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-酶标抗原偶联物的制备：制备葡萄糖脱氢酶溶液，活化心型脂肪酸结合蛋白，使葡萄糖脱氢酶与心型脂肪酸结合蛋白偶联；

（2）心型脂肪酸结合蛋白均相免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由心型脂肪酸结合蛋白抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-酶标抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

5.根据权利要求4所述的一种心型脂肪酸结合蛋白免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

葡萄糖脱氢酶（GDH）溶液的制备：

a. 称取15mg规格为100KU的GDH，室温溶解于12mL含有72.6mg（0.05M）PBS、8mgMgCl2（3.3mM）和100mg NaCl的溶液中, 该溶液pH=8.0；

b. 加入225mg还原态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH，135mg葡萄糖以及0.75mL 卡必醇；

c. 逐滴加入2mL二甲基亚砜

2）心型脂肪酸结合蛋白的活化

a. 在无水状态下称取10mg心型脂肪酸结合蛋白，溶解于600μLDMF中；

b. 上述溶液温度降到2-8℃；

c. 加入3μL三丁胺；

d. 加入3μL氯甲酸异丁酯；

e. 2-8℃搅拌30分钟

3）葡萄糖脱氢酶与心型脂肪酸结合蛋白的偶联

a. 将上述活化好的心型脂肪酸结合蛋白溶液缓慢滴加至葡萄糖脱氢酶溶液中；

b. 2-8℃搅拌过夜。

6.根据权利要求4所述的一种心型脂肪酸结合蛋白均相酶免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，步骤（2）的具体过程如下：

试剂1的制备：将4.036g（11.25mM）氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD、1.711g（11.25mM）葡萄糖用1L 50mM、pH=8.0 的PBS缓冲液溶解制成均相酶底物；将制备的心型脂肪酸结合蛋白抗体加到上述均相酶底物中，抗体与均相酶底物的体积比为1:100～1:10000；

试剂2的制备：将制备的葡萄糖脱氢酶—酶标抗原偶联物加到50mM、pH=8.0 的PBS缓冲液中，上述偶联物与PBS缓冲液的体积比为1:100～1:10000。

7.利用权利要求1至3任意一项所述的心型脂肪酸结合蛋白免疫检测试剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将待测样本与心型脂肪酸结合蛋白抗体接触；

2）根据待测样本中心型脂肪酸结合蛋白与心型脂肪酸结合蛋白抗体的结合情况，

利用指示试剂判断样本中心型脂肪酸结合蛋白的含量；所述待测样本为血清、血浆、唾液或尿液。