[发明专利]一种利用血红素/伴侣素人工酶检测溶液中物质含量的应用在审
| 申请号： | 201711402603.4 | 申请日： | 2017-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN108132240A | 公开（公告）日： | 2018-06-08 |
| 发明（设计）人： | 王小强;王超;潘美红 | 申请（专利权）人： | 中国石油大学（华东） |
| 主分类号： | G01N21/75 | 分类号： | G01N21/75;G01N21/31 |
| 代理公司： | 青岛联信知识产权代理事务所(普通合伙) 37227 | 代理人： | 段秀瑛 |
| 地址： | 266580 山东省青岛市经济*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人工酶 血红素 伴侣 应用 检测 过氧化氢反应 血清中葡萄糖 过氧化氢的 生物酶检测 活性位点 邻苯二胺 生物诊断 市政污水 污水监测 血红素酶 底物 监测 | ||
1.一种利用血红素/伴侣素人工酶通过与过氧化氢反应检测溶液中物质含量的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，血红素/伴侣素人工酶以邻苯二胺为底物，通过与溶液中的过氧化氢反应直接检测溶液中过氧化氢的含量。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测步骤包括：
将2mM邻苯二胺溶液和20μM血红素/伴侣素人工酶溶液以及含1-750μM过氧化氢溶液等体积混合，得到混合液Ⅰ；
将所得混合液Ⅰ置于37℃水浴锅中孵育30min；
向孵育后的混合液中加入3.5μM硫酸终止反应，得到混合液Ⅱ；
测量混合液Ⅱ于492nm处的吸光度；
制备所得吸光度与过氧化氢浓度的标准曲线，计算过氧化氢的含量。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述过氧化氢含量的线性范围为10-90μM，检测限为7μM。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述溶液为工业污水或市政污水。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，血红素/伴侣素人工酶以邻苯二胺为底物，通过与葡萄糖溶液中的过氧化氢反应间接检测葡萄糖溶液中葡萄糖的含量。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测步骤包括：
将5μl 200units/mL葡萄糖氧化酶和50μL 0.1-1.8mM葡萄糖溶液混合，得到混合液Ⅲ；
将所得混合液Ⅲ置于37℃水浴锅中孵育30min；
向孵育后的混合液中加入等体积2mM邻苯二胺和20μM血红素/伴侣素人工酶，得到混合液Ⅳ；
将所得混合液Ⅳ置于37℃水浴锅中孵育30min；
向孵育后的混合液中加入3.5μM硫酸终止反应，得到混合液Ⅴ；
测量混合液Ⅴ于492nm处的吸光度；
制备所得吸光度和葡萄糖浓度的标准曲线，计算葡萄糖的量。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述葡萄糖的线性范围为15μM-200μM，检测限为11μM。
9.根据权利要求1-8任一项所述的应用，其特征在于，所述血红素/伴侣素人工酶具有直径为4.5nm的纳米空腔，且所述纳米空腔中同时含有多个血红素活性位点。
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