[发明专利]一种制备血管内皮细胞的方法及其专用试剂盒

说明书

本发明公开了一种制备血管内皮细胞的方法及其专用试剂盒。所述试剂盒含有培养液II和培养液I；培养液II包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、VEGF、bFGF和不含血清的基础培养液；培养液I包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、BMP4、GSK3抑制剂和不含血清的基础培养液。实验证明，采用本发明提供的制备方法可以获得血管内皮细胞，且该制备方法使用的培养液不仅能够使人多能干细胞快速高效的分化成血管内皮细胞，而且化学成分确定、无动物源蛋白、无胰岛素添加。采用本发明提供的制备方法可大规模生产人血管内皮细胞，质量稳定，安全性高。本发明具有重大的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种制备血管内皮细胞的方法及其专用试剂盒。

背景技术

人多能干细胞(包括人诱导性多能干细胞和人胚胎干细胞)可分化为各种组织器官的功能性细胞，用于研究人类发育，制作疾病模型，并可通过细胞移植，取代损伤病变的细胞，促进机体创伤修复、治疗疾病。干细胞与再生医学将改变传统对于坏死性和损伤性等疾病的治疗手段，对疾病的机理研究和临床治疗带来革命性变化。

血管内皮细胞是人体血管的重要构成细胞，在损伤修复、血管重建、缺血性疾病治疗、组织工程、药物研发、建立疾病模型等等方面有重要应用价值。目前很难获得大量的血管内皮细胞，而且扩增能力有限，价格昂贵，培养液成分不确定，含动物源成分，大大限制了相关临床应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何制备血管内皮细胞。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了用于制备血管内皮细胞的试剂盒；所述试剂盒可含有培养液II；所述培养液II可包括血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和不含血清的基础培养液。

上述试剂盒中，所述培养液II具体可由血清白蛋白、转铁蛋白、维生素C、亚硒酸钠、VEGF、bFGF和不含血清的基础培养液组成。

上述试剂盒中，每1mL所述培养液II可包括0.1-2.5mg血清白蛋白(如0.1-0.5mg血清白蛋白、0.5-2.5mg血清白蛋白、0.1mg血清白蛋白、0.5mg血清白蛋白或2.5mg血清白蛋白)、1-25μg转铁蛋白(1-5μg转铁蛋白、5-25μg转铁蛋白、1μg转铁蛋白、5μg转铁蛋白或25μg转铁蛋白)、0.04-1mg维生素C(0.04-0.2mg维生素C、0.2-1mg维生素C、0.04mg维生素C、0.2mg维生素C或1mg维生素C)、2-50ng亚硒酸钠(2-10ng亚硒酸钠、10-50ng亚硒酸钠、2ng亚硒酸钠、10ng亚硒酸钠或50ng亚硒酸钠)、10-250ng VEGF(10-50ng VEGF、50-250ng VEGF、10ng VEGF、50ng VEGF或250ng VEGF)和2-50ng bFGF(2-10ng bFGF、10-50ng bFGF、2ngbFGF、10ng bFGF或50ng bFGF)，所述培养液II的基础液可为不含血清的基础培养液，pH值可为7.0～7.6(如7.0～7.3、7.3～7.6、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5或7.6)。