[发明专利]一种抗CD19的全人源抗体或抗体片段及其方法和应用

权利要求书

1.一种抗CD19的全人源抗体，其特征在于，该抗体包含：重链和轻链；

所述的重链和轻链均包括可变区，所述的可变区包括互补决定区CDR1、CDR2和CDR3；

所述的重链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3分别用HCDR1、HCDR2和HCDR3表示；

所述的轻链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3分别用LCDR1、LCDR2和LCDR3表示；

所述的HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

所述的HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；

所述的HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；

所述的LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示；

所述的LCDR2的氨基酸序列为DVS；

所述的LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示。

2.根据权利要求1所述的抗CD19的全人源抗体，其特征在于，所述的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.根据权利要求1或2所述的抗CD19的全人源抗体，其特征在于，所述的重链用VH表示，所述的轻链用VL表示；所述的抗体的氨基酸序列还包括VH-GGGGGS-VL和/或VL-GGGGGS-VH。

4.根据权利要求3所述的抗CD19的全人源抗体，其特征在于，所述的抗体以2×10^-6M 或更低的KD值与人CD19蛋白结合。

5.一种多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码如权利要求1-4中任意一项所述的抗CD19的全人源抗体；

所述的多核苷酸包含：用于编码所述的重链可变区的核苷酸序列SEQ ID NO：8，以及用于编码所述的轻链可变区的核苷酸序列SEQ ID NO：9。

6.一种嵌合抗原受体，其特征在于，该受体含有如权利要求1-4中任意一项所述的抗CD19的全人源抗体；该受体包含依次连接的：信号肽序列、CD19结合结构域、检测标签、铰链区和跨膜结构域，以及功能性信号传导结构域；所述的CD19结合结构域为所述的抗CD19的全人源抗体。

7.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于，

所述的铰链区和跨膜结构域包含：铰链区Hinge TM和跨膜结构CD8，该铰链区Hinge TM和跨膜结构CD8的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；

所述的功能性信号传导结构域包含：依次连接的CD28、4-1BB和CD3 Zeta；

所述的CD28的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示；

所述的4-1BB的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示；

所述的CD3 Zeta的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示；

所述的信号肽序列包含CSF2RA，其氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示；

所述的检测标签包含C-Myc，其氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。

8.一种用于治疗或预防肿瘤的T细胞，其特征在于，该T细胞含有如权利要求6或7所述的嵌合抗原受体。

9.一种制备嵌合抗原受体的方法，其特征在于，所述的嵌合抗原受体为权利要求6或7所述的嵌合抗原受体，所述的嵌合抗原受体使用转座子构建。

10.一种检测效应细胞被激活的方法，其特征在于，该方法包含：将表达CD19的肿瘤细胞和不表达CD19的肿瘤细胞均作为靶细胞，分别表示为表达CD19组和不表达CD19组，将表达嵌合抗原受体CD19-C8scFv-CAR-T细胞作为效应细胞，将表达CD19组和不表达CD19组分别与效应细胞共培养，检测细胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF的水平；

若在表达CD19组中CD19-C8scFv-CAR-T细胞分泌的细胞因子的水平高于不表达CD19组，所述的CAR-T效应细胞被激活；

所述的CD19-C8scFv-CAR-T细胞为如权利要求8所述的用于治疗或预防肿瘤的T细胞。