[发明专利]一种抑制牛FABP4基因表达的shRNA、构建载体及其应用

说明书

本发明涉及一种抑制牛FABP4基因表达的shRNA、构建载体及其应用，属于分子生物学技术领域。编码所述shRNA的DNA序列，如SEQ ID NO 1～3所示。所述的抑制牛FABP4基因表达的shRNA构建于载体上，得到含有所述shRNA的重组载体；将含有所述shRNA的重组载体作用于细胞，达到抑制牛FABP4基因表达的目的。该shRNA能有效抑制牛FABP4基因在mRNA及蛋白水平的表达。

技术领域

本发明涉及一种抑制牛FABP4基因表达的shRNA、构建载体及其应用，属于分子生物学技术领域。

背景技术

脂肪酸结合蛋白4(Fattyacidbindingprotein4,FABP4)亦称aP2或A-FABP，属于脂肪酸结合蛋白超家族，编码132个氨基酸，相对分子质量约14.6kDa。它在脂肪组织中高表达，是成熟脂肪细胞中主要的胞质蛋白，约占细胞总蛋白的6％。研究表明FABP4能够可逆性地结合饱和及不饱和长链脂肪酸，促进脂肪酸的代谢和转运，调控脂类生成及降解，在介导胞内脂肪酸转运和能量代谢过程中起重要作用。猪和鸡的FABP4基因已被证实是肌内脂肪含量(IMF)的候选基因。

随着RNA干扰技术的不断深入发展，将设计合成的shRNA构建到慢病毒表达系统，进而感染特定的靶细胞，特异性沉默相关基因表达，已经成为研究基因功能的最有效的手段之一，也是靶向基因治疗的有效途径。shRNA慢病毒表达系统有效克服了以往人工合成的siRNA转染效率低、持续时间短等不足，已经逐步发展成为在原代细胞及体内研究基因功能的有效途径之一。针对牛FABP4基因设计特异性的shRNA序列，构建相应的载体，为今后深入研究牛FABP4基因的功能奠定了基础，可广泛应用于牛FABP4基因相关的细胞及动物模型，具有重要的应用前景和经济价值。

发明内容

本发明的目的是：提供一种抑制牛FABP4基因表达的shRNA、构建载体及其应用。

技术方案是：

本发明的第一个方面，提供了：

一种抑制牛FABP4基因表达的shRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～3所示。

在一个实施例中，所述的shRNA优选核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的第二个方面，提供了：

含有SEQ ID NO.1～3所示核苷酸序列的表达载体。

所述的表达载体是质粒或者病毒。

所述的表达载体，是指在HindIII和BamH1之间插入上述shRNA的pSilencer 4.1-CMV。

本发明的第三个方面，提供了：

上述的表达载体的构建方法，包括如下步骤：将编码SEQ ID NO.1～3所示核苷酸序列DNA连接到载体中，构建表达载体。

本发明的第四个方面，提供了：

包含有上述表达载体的宿主细胞。

本发明的第五个方面，提供了：

上述的表达载体在制备抑制牛FABP4基因表达的试剂中的应用。

有益效果

(1)本发明提供了两对能有效抑制牛FABP4基因表达的DNA序列。

(2)本发明构建了能稳定表达含有编码牛FABP4基因的shRNA序列的DNA序列的载体。

附图说明