[发明专利]一种可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，包括将从人尿中提取的尿蛋白浓缩液依次经金属螯合亲和层析柱、阴离子层析柱、凝血酶亲和层析柱、疏水层析柱层析，得到血凝调节蛋白。

2.根据权利要求1所述的可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，所述的尿蛋白浓缩液由以下步骤制备得到：利用离子交换树脂作为吸附剂吸附尿液中的尿蛋白，清洗、解吸附，超滤浓缩即得尿蛋白浓缩液。

3.根据权利要求2所述的可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，所述的解吸附为利用0.5～1.5mol/L的NaCl水溶液进行尿蛋白的解吸附。

4.根据权利要求1所述的可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，所述的金属鳌合亲和层析柱的鳌合金属离子是Cu²⁺、Zn²⁺、Ni²⁺、Fe³⁺中的任意一种，其层析时所用的平衡液为0.02-0.2mol/L醋酸盐或磷酸盐缓冲液，所述缓冲液含0.05-0.5mol/L的NH₄Ac；洗脱液为0.02-0.2mol/L磷酸盐水溶液，所述水溶液含0.05-0.5mol/L NH₄Ac和0.02-0.2mol/L咪唑，pH为6.0-8.0。

5.根据权利要求4所述的可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，冲洗液为0.02-0.2mol/L磷酸盐或者醋酸盐水溶液，所述水溶液含0.1-0.5mol/L NH₄Ac，pH为5.0-8.0。

6.根据权利要求1所述的可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，所述的阴离子层析柱平衡洗脱液为0.02-0.2mol/L磷酸盐缓冲液或醋酸盐缓冲液，pH为5-8。

7.根据权利要求1所述的可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，所述的凝血酶亲和层析柱平衡液为0.02-0.2mol/L磷酸盐缓冲液，所述缓冲液含0.1-0.8mol/L NaCl，pH为5-7；洗脱液为0.02-0.2mol/L磷酸盐缓冲液，所述缓冲液含0.5-1.5mol/L NaCl，pH为5-7。

8.根据权利要求1所述的可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，所述的凝血酶亲和层析和疏水层析之间还包括去病毒步骤。

9.根据权利要求1所述的可工业化生产的人来源血凝调节蛋白的制备方法，其特征在于，所述的疏水层析柱平衡液为0.02-0.2mol/L磷酸盐缓冲液，所述缓冲液含0.5-2.0mol/L(NH₄)₂SO₄，pH为6-8；洗脱液为0.02-0.2mol/L磷酸盐缓冲液，所述缓冲液含0.2-1.0mol/L(NH₄)₂SO₄，pH为6-8。