[发明专利]甘露多糖半抗原、偶联物及应用

说明书

本发明公开一种式(I)甘露多糖半抗原、偶联物及应用，属于免疫学技术领域。本发明的技术方案是把式(I)结构的甘露多糖半抗原进行修饰，在多糖末端羰基上连接多个CH2和NH2或COOH，通过NH2或COOH偶联多肽、蛋白等载体物质，使半抗原获得免疫原性和抗原性，并能结合在固相载体上。通过上述方法获得的半抗原偶联物一方面可用于制备抗体，另一方面可用于免疫方法检测样品中的抗体。本发明具有免疫原性强、检测简便、特异性高等优点。

技术领域

本发明涉及一种式(I)甘露多糖半抗原、偶联物及应用，具体涉及甘露多糖半抗原的偶联物结构、糖苷键连接方式，以及在制备抗体及检测样品中抗体方面的应用。属于免疫学技术领域。

背景技术

肠道菌细胞壁多糖在一些自体免疫性疾病的发生发展过程中起重要作用，这些自体免疫性疾病患者的血清中检测到甘露多糖的抗体。其中抗酿酒酵母甘露聚糖IgA(anti-Saccharomyces cerevisiae immunoglobulin A，ASCA-IgA)和抗酿酒酵母甘露聚糖IgG(anti-Saccharomyces cerevisiae immunoglobulin G，ASCA-IgG)是被临床广泛认可的克罗恩病的特异性指标。迄今为止，在临床应用的酿酒酵母甘露聚糖抗原是天然结构的糖蛋白，甘露多糖的结构包含了alpha-1，2、1，3和1，6糖苷键结构，具体哪个结构是ASCA的主要抗原表位未知。由于各厂家原料来源不同，抗原表位的暴露程度不同，质控难度大，检测结果差异显著。为此，以色列科学家发明了用甘露二糖anti-mannobioside carbohydrateIgG antibodies(AMCA)替代酿酒酵母甘露聚糖用于克罗恩的诊断，对比文献US2010/0254971A1公布了AMCA的甘露多糖之间是单纯的alpha-1，3糖苷键连接。但是AMCA用于克罗恩病检测时，其检测灵敏度仍然不如质量较高的ASCA检测试剂，提示由单纯alpha-1，3糖苷键组成的甘露寡糖不是最佳的ASCA替代物。

此外，目前ASCA和AMCA的检测方法主要是ELISA，对比文献CN 204666639 U报道了天然提取的酿酒酵母细胞壁甘露聚糖蛋白可实现免疫层析检测，但对于糖链较短的甘露二糖或甘露多糖，由于抗原表位间位阻较小，不加以改变的情况下，实现免疫层析法检测抗甘露多糖抗体的难度很大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甘露多糖半抗原结构及偶联物，及其在检测抗甘露多糖抗体检测中的应用，以解决上述ASCA及AMCA检测中存在的两大问题。

本发明的第一方面，提供一种式I所示甘露多糖半抗原的结构，根据这一结构，用化学合成方法能有效获得本发明所述的甘露多糖半抗原。其中，所述的甘露多糖半抗原是由alpha-1，3与alpha-1，2糖苷键连接形成，其中n1、n2、n3和n为大于等于1的整数，分别表示alpha-1，3糖苷键、alpha-1，2糖苷键、CH2和甘露多糖的数量。R表示NH2或COOH。

在优选实施例中，甘露多糖的结构如式II～式V所示。

优选地，alpha-1，3糖苷键的数量为1～6个，alpha-1，2连接的糖苷键数量为2～6个，更优选地，为式II～式IV所示的甘露多糖。

本发明的第二方面，提供了一种甘露多糖半抗原与产生抗原性的载体物质结合的偶联物，所述甘露多糖半抗原为前述的甘露多糖半抗原，载体物质为蛋白质、蛋白质片段、合成多肽或半合成多肽。优选地，载体物质为生物素、链亲和素(SA)、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、铜蓝蛋白(KLH)或牛甲状腺球蛋白(BTG)。

在一个优选实施例中，载体物质为BSA和HSA。

一种优选方案，式I中的R为NH2，此NH2基团跟生物素反应被生物素化，然后与固相载体上的SA反应，或先跟SA形成复合物再包被到固相载体上。固相载体包括但不限于荧光微球、乳胶微球、磁性微球、微孔板、硝酸纤维素膜。