[发明专利]预苯酸脱氢酶及其多克隆抗体在审
| 申请号： | 201711377195.1 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN107955807A | 公开（公告）日： | 2018-04-24 |
| 发明（设计）人： | 宫春杰;顾昌祺;陶冶;胡征;杨波 | 申请（专利权）人： | 湖北工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C07K16/40;C07K16/06 |
| 代理公司： | 武汉开元知识产权代理有限公司42104 | 代理人： | 王和平 |
| 地址： | 430068 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 预苯酸 脱氢酶 及其 克隆 抗体 | ||
1.一种预苯酸脱氢酶，其特征在于：所述预苯酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种编码权利要求1所述的预苯酸脱氢酶的基因，其特征在于：所述预苯酸脱氢酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种预苯酸脱氢酶的多克隆抗体，其特征在于：所述多克隆抗体的抗原为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成的多肽。
4.一种制备权利要求3所述的预苯酸脱氢酶的多克隆抗体的方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的预苯酸脱氢酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；
2)纯化抗血清得到预苯酸脱氢酶的多克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的预苯酸脱氢酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述预苯酸脱氢酶的制备方法为：
1.1)利用PCR技术扩增SEQ ID NO.2所示的碱基序列；
1.2)将SEQ ID NO.2所示的碱基序列克隆入载体质粒中，构建预苯酸脱氢酶的表达载体；
1.3)将表达载体转化入大肠杆菌感受态菌体中得到重组菌体，依次经扩大培养、诱导表达、收集菌体、破碎菌体和纯化蛋白过程得到预苯酸脱氢酶蛋白。
6.根据权利要求4所述的预苯酸脱氢酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述纯化抗血清的方法为：将预苯酸脱氢酶蛋白与Ni-NTA偶联制备成抗体纯化层析柱，再将待纯化的抗血清与PBS按照1:1比例混合后经过抗体纯化层析柱，待抗血清中的抗体与预苯酸脱氢酶蛋白结合完全后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，获得纯化的预苯酸脱氢酶的多克隆抗体。
7.根据权利要求5所述的预苯酸脱氢酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.1)中，PCR技术扩增所用的引物为：正向引物如SEQ ID NO.3所示，反向引物如SEQ ID NO.4所示。
8.根据权利要求5所述的预苯酸脱氢酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.2)中载体质粒为pET21a(+)。
9.根据权利要求5所述的预苯酸脱氢酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.3)中，大肠杆菌感受态菌体为大肠杆菌BL21感受态菌体。
10.根据权利要求5所述的预苯酸脱氢酶的多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1.3)中，所述纯化蛋白过程中利用Ni-NTA亲和层析色谱柱进行蛋白纯化。
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