[发明专利]双脂肪链取代基磷脂酰乙醇胺壳聚糖的应用

权利要求书

1.双脂肪链取代基磷脂酰乙醇胺壳聚糖的应用，其特征在于，将由双脂肪链取代基磷脂酰乙醇胺壳聚糖制备的双脂肪链取代基磷脂酰乙醇胺壳聚糖-脂质体用于抗人非小细胞肺癌细胞A549药物载体的制备：

低分子量壳聚糖0.8554 g，溶于50 mL的NaAc/HAc pH=4.5 的缓冲溶液中，超声30min，使其溶解；高碘酸钠0.1093 g，溶于50 mL的NaAc/HAc pH=4.5的缓冲溶液中，超声30min；以上两种溶液分别置于冰浴，并通入高纯氮气脱气30 min，将两种溶液混合，在0-4 ℃下搅拌反应24 h，加入10 mL乙二醇中止反应；反应液转移到透析袋MWCO=3000 Da中，透析，冻干，制备甲酰基壳聚糖；

称取甲酰基壳聚糖0.16 g，分散到20 mL甲醇溶液中，加入1,2-二油酰基磷脂酰乙醇胺0.3 g，氮气保护，50 ℃下搅拌反应42 h，加入0.1 g硼氢化钠室温继续搅拌24 h，旋转蒸发去除乙醇溶剂后，分散到水中后用去离子水透析，再冷冻干燥，得到1,2-二油酰基磷脂酰乙醇胺壳聚糖；

配制1 mg/mL的1,2-二油酰基磷脂酰乙醇胺壳聚糖水溶液，取500 μL ，与包含SPIO的DOTAP阳离子脂质体1 mL通过超声的方式混合，然后静置1 h，通过后插入自组装的方式，对脂质体进行修饰，获得表面具有壳聚糖刷子的脂质体药物载体；

将人非小细胞肺癌细胞A549细胞系在培养箱中培养至细胞融合度达到80%后，将培养基吸去，用PBS洗涤，血清条件下转运时，加入含10%血清的培养基和表面具有壳聚糖刷子的脂质体药物载体与DNA复合物，培养18 h后，吸出培养基，换上新鲜的含10%血清的培养基继续培养32 h。