[发明专利]一种药物脂质体/p53基因复合物的应用

说明书

本分案申请提供了一种药物脂质体/p53基因复合物的应用。该复合物由含有白藜芦醇的药物脂质体和p53基因组成。首先以多肽型阳离子类脂、助类脂和白藜芦醇为主要原料，依次通过薄膜分散法、超声水化法和凝胶色谱柱分离法，制备药物脂质体，然后将该药物脂质体和p53基因混合，通过静电复合的方法制备得到药物脂质体/基因复合物。本发明提供的药物脂质体/基因复合物通过白藜芦醇激活p38MAPK激酶活性诱导p53基因活化，使之表达野生型p53蛋白，协同发挥白藜芦醇和p53基因的抗肿瘤作用，引发肿瘤细胞凋亡，达到肿瘤治疗的目的。体外生物学研究表明，该复合物具有一定的细胞增殖抑制能力，野生型p53蛋白表达高，为肿瘤治疗提供了新思路，具有潜在的应用价值。

本申请为申请号2017101315500、申请日2017年3月7日、发明名称“一种药物脂质体/p53基因复合物及其制备方法和应用”的分案申请。

技术领域：

本发明涉及一种药物脂质体/p53基因复合物，更具体地说涉及一种含白藜芦醇的多肽型阳离子药物脂质体的制备及其在与p53基因形成新型抗肿瘤复合物制剂中的应用，属于肿瘤治疗领域新型药物制剂及其制备方法与应用。

背景技术：

药物和基因的联合转运治疗是一种利用载体将抗癌药物和基因高效传递到肿瘤细胞当中，适时释放药物和基因已达到协同治疗目标的生物医学治疗方法。目前，联合转运治疗体系主要包括药物/药物、药物/siRNA、药物/pDNA等针对各种疾病的治疗方法体系。运载药物与核酸的载体脂质体，还包括聚合物胶束和PLGA纳米粒子等多聚物载体。在同一载体系统中，联合转运药物和DNA作用于肿瘤细胞比单独转运DNA或者药物更有治疗效果。因此，制备一种安全高效的复合物载体已经成为了近年来研究的重点。

我国具有丰富的药用植物资源，尤其民族地区天然植物种类繁多，目前，喜树碱、紫杉醇、冬凌草类、三尖杉碱类等多种天然抗癌药物大部分均产自该地区。天然抗肿瘤药物研发及应用以其低毒性、低毒副作用的优势已经广泛应用于癌症的治疗中。白藜芦醇作为新发现的一种产自我国民族地区的天然抗癌药物，其药理活性和抗癌机制的研究进展才刚刚起步。目前，已经发现白藜芦醇对乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌、皮肤癌、肝癌等多种恶性肿瘤细胞均有明显的抑制作用。其中，白藜芦醇对激素依赖性肿瘤细胞的生长具有显著的抑制作用。从白藜芦醇的结构上看，其是一种非黄酮类的多酚类物质，由于氧化损伤是导致癌症的重要原因之一，多酚的抗氧化功能可以对癌症起到预防作用和一定程度上的抑制作用。白藜芦醇的抗癌机制十分复杂，目前发现，白藜芦醇可以通过激活p38MAPK活性，诱导细胞通路中p53蛋白第15位丝氨酸的磷酸化从而激活p53蛋白的活化，磷酸化的p53蛋白可以下调Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的表达，Bax蛋白能开启线粒体膜通道，细胞色素c和其他凋亡前体蛋白就能从线粒体中释放出来，caspase活化，起始凋亡。然而，白藜芦醇在光、热和氧化剂存在条件下容易被氧化分解，在一定程度上限制了其在食品和医药行业的应用。

随着分子生物学的发展，人们从肿瘤致病的分子水平上获知，癌症实际上就是一种基因病，要么是抑癌基因的失活，要么是原癌基因被异常激活。目前，主要的抑癌基因包括Rb基因、p53基因、WT1基因、DCC基因、APC基因、NF1基因、MTS1基因、WAF1基因、BRCA基因和BRCA2基因等。其中，p53基因在调节细胞周期和控制细胞凋亡上发挥重要作用，有研究表明，P53基因通过表达野生型的p53蛋白起到控制细胞凋亡的作用，已经成为了肿瘤方面研究的热点。

阳离子脂质体作为非病毒载体材料能够有效的保护被包裹的药物，提高其稳定性和生物利用度，并且还具有毒性低、生物相容性高和可生物降解等明显优势。在药物和基因联合转运方面，Sadd等通过阳离子脂质体共载沉默Bcl-2、MDP1、MDR1基因的siRNA和阿霉素(DOX)对肺癌细胞进行治疗，并证明了基因与药物的协同治疗作用；Kang等也同样通过阳离子脂质体共载NIK-siRNA和5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗肝癌，结果显示，脂质体共载的肿瘤细胞凋亡情况明显多于单载。阳离子脂质体作为药物载体，同时可以介导基因输送入细胞，具有独特的优势和良好的发展前景。