[发明专利]一种抗ER-α36单克隆抗体

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种优化的高亲和力抗ER‐α36单克隆抗体的制备与应用。本发明在原有抗体的基础上，以人源化抗体序列为模板，进行随机突变，制备噬菌体抗体库，进行多轮筛选，得到了优化的重链可变区氨基酸序列，该抗ER‐α36单克隆抗体的亲和力高于原抗体，为开发ER‐α36治疗和诊断产品提供了更优化的候选抗体。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种优化的抗ER‐α36单克隆抗体。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，肿瘤组织中雌激素受体(ER)的表达水平被广泛认为是预测患者对内分泌治疗反应和预后的重要指标之一。在乳腺癌的治疗中，主要的内分泌药物治疗方法是抑制病人体内的雌激素水平或根据病人的雌激素受体表达水平而应用雌激素受体调节剂。目前约80％的ERα阳性乳腺癌患者生存时间超过5年，主要原因是采用了良好的内分泌治疗内分泌治疗药物目前主要包括选择性ER调节剂如他莫昔芬(TAM)，及芳香化酶抑制剂等。但有20％‐30％的ERα阳性乳腺癌患者对TAM耐药，导致治疗效果不佳。

雌激素受体ER‐α66是目前临床选择TAM进行内分泌治疗的生物标志物，并不包括另外2种亚型ER‐α46和ER‐α36。雌激素受体ER‐α36是2005年新发现的一种雌激素受体，主要介导快速雌激素信号通路，并且能抑制传统的核雌激素信号通路，在细胞的正常生理和疾病发生及发展过程中起到至关重要的作用。其表达水平与肿瘤的一些生物学指标如淋巴结转移、细胞分化水平和肿瘤分期及分级有着密切联系。研究表明，ER‐α66和ER‐α36均为阳性的患者不能从TAM治疗中获益。因此，在临床上选择乳腺癌治疗方案时，ER‐α36表达水平可作为一个重要指标来评估乳腺癌内分泌治疗的预后。这为开发ER‐α36诊断试剂提供了理论依据，可通过分子分型以实现个体化治疗。

针对ER‐α36的单克隆抗体的研发建立在ER‐α36参与调控细胞生长，分化和凋亡的研究基础上。本团队专利号为WO 2014/146575A1的专利是利用动物免疫方法和基因工程等技术，建立特异性抗原的体外筛选方法和细胞生物学检测方法，最终筛选得到的一种鼠源单克隆抗体，并将该单克隆抗体通过计算机辅助设计实现人源化。本团队在深入研究中发现，上述专利中涉及的抗体在亲和力和生物学活性等方面还存在提高的空间，基于此，我们采用抗体成熟化技术和噬菌体抗体库筛选方法，对上述抗体进行了改进性优化。

发明内容

本发明提供了一种改进优化的抗ER‐α36单克隆抗体；本发明以WO 2014/146575A1专利中的人源化抗体多聚核苷酸序列为模板，进行随机突变改造，制备噬菌体抗体库，进行了多轮筛选，得到了一个亲和力高于原专利人源化抗体的新的抗ER‐α36单克隆抗体。

为实现上述目的，本发明提供了一种改进优化的抗ER‐α36单克隆抗体，包括：

轻链和重链；所述轻链可变区的氨基酸序列包含SEQ NO.2；所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ NO.1，5和6。

其中，本发明还提供了一种包含上述轻链可变区或上述重链可变区的抗体、多肽或蛋白。

其中，本发明还提供了一种编码包含上述轻链可变区或上述重链可变区氨基酸序列的多聚核苷酸序列或组合。

其中，本发明还提供了一种包含上述多聚核苷酸序列或组合的重组DNA表达载体。

其中，重链恒定区选自鼠的IgG2b。

其中本发明还提供了一种包含上述轻链可变区或上述重链可变区的全长抗体和抗ER‐α36单克隆抗体的片段，所述片段包含但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。

其中，所述抗体可用于制备检测试剂或试剂盒。