[发明专利]制备高纯度伊诺肝素方法

说明书

本发明公开了一种伊诺肝素的提纯制备方法，属于生物工程领域。主要包括阴离子交换树脂，疏水层析树脂。此工艺操作简单，安全可控，成本低。

技术领域

本发明涉及一种生物药用原料的制备方法，属于生物工程领域，具体是一种生产依诺肝素钠的工艺。

背景技术

依诺肝素钠属于伊诺肝素，主要特征为分子中有一个４一烯吡喃糖醛酸结构。本品抗血栓作用强、出血危险性小，是目前抗凝血、抗血栓形成的主要治疗药物之一，２００６年的全球销售额达２４、３ＭＬ欧元。曾经法国Ａｖｅｎｔｉｓ公司研发，并于１９９３年申请过制备工艺的专利。一般伊诺肝素钠的制备方法制备得到的伊诺肝素钠含量偏低，杂质较多。采用该专利方法生产的样品能够最大程度的去处在各个反应过程中产生的杂质，提高伊诺肝素钠的含量，减少杂质，所得依诺肝素钠成品均符合欧洲药典。

发明内容

本发明在于解决上述问题，提供一种纯度高，安全性好的伊诺肝素钠的制备方法。

本发明的技术方案为：

1）、将粗品伊诺肝素钠溶于质量百分浓度2.0%-3.0%氯化钠溶液中，得到伊诺肝素的溶液，向滤液中加质量百分浓度为10%-20%的氢氧化钠溶液直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得滤液；

2）、将步骤（1）中滤液用体积浓度（V/V）在0.9%-2.7%之间的盐酸溶液调pH到8.0-8.5，上疏水层析柱葡聚糖凝胶柱，用氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液；

3）、将步骤（2）中收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到弱酸性丙烯酸系阴离子交换柱。上样结束后，用0.2mol/L-0.5mol/L的氯化钠溶液洗涤柱体直至钡盐检测无白色浑浊，最后以1mol/L-3mol/L的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液；

4）、将步骤（3）中的洗脱液用纳滤膜孔径500-1000nm的纳滤脱盐浓缩，直至浓缩液中肝素钠的浓度为10wt%-25wt%；

5）、将步骤（4）中得到的浓缩液沉淀，干燥即得到依诺肝素钠成品。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：

本发明的核心优势是经过葡聚糖凝胶层析柱及阴离子交换柱可以去除大量的在反应过程中产生的杂质，效果好，保证制备得到的伊诺肝素钠有较高的纯度及极低的杂质残留。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

将50g一诺肝素钠溶于质量百分浓度2.0%氯化钠溶液中，得到伊诺肝素的溶液，向滤液中加质量百分浓度为10%的氢氧化钠溶液直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得滤液；

将滤液用体积浓度（V/V）为0.9%盐酸调批pH到8.0，上葡聚糖凝胶G15层析柱，用浓度为1mol/L，pH8.0的氯化钠溶液洗脱3倍柱体积，收集洗脱液；将收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到弱酸性丙烯酸系阴离子交换柱，上样结束后，分别用0.3mol/L的氯化钠溶液洗涤柱体直至钡盐检测无白色浑浊，最后以2mol/L的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液；洗脱液用孔径1000纳的滤膜过滤脱盐浓缩，浓缩液中伊诺肝素钠的浓度为15wt%；将得到的浓缩液沉淀，干燥即得到依诺肝素钠成品。最终得到的一诺肝素钠各项指标符合《欧洲药典7.0》，且其纯度为91%。

实施例2：

将50g一诺肝素钠溶于质量百分浓度2.5%氯化钠溶液中，得到伊诺肝素的溶液，向滤液中加质量百分浓度为20%的氢氧化钠溶液直至产生沉淀，静置，过滤去除不溶物，得滤液；

将滤液用体积浓度（V/V）为2.5%盐酸调批pH到8.5，上葡聚糖凝胶G15层析柱，用浓度为1mol/L，pH8.0的氯化钠溶液洗脱3倍柱体积，收集洗脱液；将收集的洗脱液用纯化水稀释，将稀释的洗脱液上样到弱酸性丙烯酸系阴离子交换柱，上样结束后，分别用0.5mol/L的氯化钠溶液洗涤柱体直至钡盐检测无白色浑浊，最后以2mol/L的氯化钠溶液洗涤，收集洗脱液；洗脱液用孔径500纳的滤膜过滤脱盐浓缩，浓缩液中伊诺肝素钠的浓度为17wt%；将得到的浓缩液沉淀，干燥即得到依诺肝素钠成品。最终得到的一诺肝素钠各项指标符合《欧洲药典7.0》，且其纯度为88%。