[发明专利]一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂

说明书

技术领域

本发明涉及水产养殖领域，具体是一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂。

背景技术

免疫刺激剂((immunologic stimulant)是指能够调节动物免疫系统并激活免疫机能，增强机体对细菌和病毒等传染性病原体抵抗力的一类物质。近年来，国内、外均开展了将免疫刺激剂用于水产养殖动物传染性疾病预防的研究，其主要目的是为了将免疫刺激剂用于预防使用化学药物难于奏效的水产养殖动物的病毒和细菌性疾病。

鱼类的免疫机制可以分为特异性和非特异性免疫，所谓非特异性免疫就是机体对非特定的病原体的防御机制，其中分布在鱼类体表粘液，血液和肾脏等器官中的溶菌酶(lysozyme)，就是一种在补体(complement)的协同作用下，可以将细菌溶解的酶补体是存在于鱼类粘液和血液中的一组蛋白质，其活化途径有两条:一是能被抗原抗体复合物激活的经典激活途径，二是能被与抗体无关的细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)和肽聚糖等激活的替代途径。无论哪种途径活化的补体都能将菌体溶解。

发明内容

本发明的目的在于提供一种安全、转染效果好，可明显提高大黄鱼的非特异性免疫的大黄鱼非特异性免疫刺激剂。制备上述免疫刺激剂的方法，肠膜明串珠菌菌种生长繁殖速度快，菌粉收获量大。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：NTM048 菌株购于位于日本千叶县木更津市 (2-5-8Kazusakamatari，Kisarazu-shi， Chiba，Japan)的独立行政法人制品评价技术基础机构专利微生物保藏中心，其保藏号为NITE BP-1519，分类命名为肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)。

一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂，成分及其重量份为：3~5份肠膜明串珠菌菌粉、10~20份β-1,3-葡聚糖、1~3份炙黄芪提取物、1~3份潞党参提取物、1~3份制首乌提取物、1~3份肉苁蓉提取物和3~5份积雪草提取物。

一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂的制备方法，包括以下步骤：

1）斜面活化培养：将保藏号为 NITE BP-1519的肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)接种到斜面培养基上进行活化培养，pH为6.0~6.5，温度为20~25℃，活化培养时间为12~24h，在培养基中加入1~2倍的无菌水，搅拌均匀得到种子液。斜面培养基成分及其重量份为：60~70份蔗糖、20~30份麦芽糖、5~6份酵母膏、5~6份大豆蛋白胨、0.005~0.008份生物素、0.01~0.02份FeSO₄·7H₂O、0.2~0.3份MgSO₄·7H₂O、 0.01~0.02份MnSO₄·H₂O、3.2~4.8份K₂HPO₄·3H₂O、0.5~0.9份KH₂PO₄、0.04~0.06份CaCl₂·6H₂O、0.2~0.5份NaCl、0.1~0.2份吐温-20、10~20份琼脂和1000~1200份水；

2）一级摇瓶培养：将种子液按3~10%的接种量转接到一级种摇瓶中，恒温摇床培养，pH为6.0~6.5，温度为20~25℃，摇床转速为100~150r/min，培养时间为12~36h；

3）二级摇瓶培养：将一级摇瓶培养得到的菌液按3~10%的接种量转接到二级种摇瓶中，进行恒温振荡培养，pH为6.0~6.5，温度为20~25℃，摇床转速为100~200r/min，培养时间为12~36h；