[发明专利]一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂

权利要求书

1.一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂，其特征在于成分及其重量份为：3~5份肠膜明串珠菌菌粉、10~20份β-1,3-葡聚糖、1~3份炙黄芪提取物、1~3份潞党参提取物、1~3份制首乌提取物、1~3份肉苁蓉提取物和3~5份积雪草提取物。

2.根据权利要求1所述的一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂，其特征在于：所述的免疫刺激剂的制备方法，包括以下步骤：

1）斜面活化培养：将保藏号为 NITE BP-1519的肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)接种到斜面培养基上进行活化培养，在培养基中加入1~2倍的无菌水，搅拌均匀得到种子液；

2）一级摇瓶培养：将种子液按3~10%的接种量转接到一级种摇瓶中，恒温摇床培养；

3）二级摇瓶培养：将一级摇瓶培养得到的菌液按3~10%的接种量转接到二级种摇瓶中，进行恒温振荡培养；

4）发酵罐培养：将二级种摇瓶培养后的菌液按3~10%的接种量接种到消毒灭菌过的发酵罐中，发酵罐培养，得到发酵液；

5）菌粉制备：将发酵罐培养得到充足的菌种，将菌种超声破碎处理，冷冻干燥得到肠膜明串珠菌菌粉；

6）免疫刺激剂制备：在3~5份肠膜明串珠菌菌粉中加入10~20份β-1,3-葡聚糖，在20~25℃温度下搅拌1~2h，再加入1~3份炙黄芪提取物、1~3份潞党参提取物、1~3份制首乌提取物、1~3份肉苁蓉提取物和3~5份积雪草提取物，混合均匀后冷冻干燥得到免疫刺激剂。

3. 根据权利要求2所述的一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂，其特征在于：所述的斜面培养基成分及其重量份为：60~70份蔗糖、20~30份麦芽糖、5~6份酵母膏、5~6份大豆蛋白胨、0.005~0.008份生物素、0.01~0.02份FeSO₄·7H₂O、0.2~0.3份MgSO₄·7H₂O、 0.01~0.02份MnSO₄·H₂O、3.2~4.8份K₂HPO₄·3H₂O、0.5~0.9份KH₂PO₄、0.04~0.06份CaCl₂·6H₂O、0.2~0.5份NaCl、0.1~0.2份吐温-20、10~20份琼脂和1000~1200份水。

4. 根据权利要求2所述的一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂，其特征在于：所述的一级种摇瓶培养基成分及其重量份为：90~100份蔗糖、30~40份麦芽糖、5~6份酵母膏、5~6份大豆蛋白胨、5~8份柠檬酸二铵、5~8份乙酸钠、0.01~0.02份FeSO₄·7H₂O、0.2~0.3份MgSO₄·7H₂O、 0.01~0.02份MnSO₄·H₂O、3.2~4.8份K₂HPO₄·3H₂O、0.5~0.9份KH₂PO₄、0.04~0.06份CaCl₂·6H₂O、0.2~0.5份NaCl、0.1~0.2份吐温-20和1000~1200份水。

5. 根据权利要求2所述的一种大黄鱼非特异性免疫刺激剂，其特征在于：所述的二级种摇瓶培养基成分及其重量份为：100~120份蔗糖、50~60份麦芽糖、5~6份酵母膏、5~6份大豆蛋白胨、5~8份柠檬酸二铵、5~8份乙酸钠、0.01~0.02份FeSO₄·7H₂O、0.2~0.3份MgSO₄·7H₂O、 0.01~0.02份MnSO₄·H₂O、3.2~4.8份K₂HPO₄·3H₂O、0.5~0.9份KH₂PO₄、0.04~0.06份CaCl₂·6H₂O、0.2~0.5份NaCl、0.1~0.2份吐温-20和1000~1200份水。