[发明专利]一种眼镜蛇毒的纯化方法及其产品

权利要求书

1.一种眼镜蛇毒的纯化方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)将含眼镜蛇毒的磷酸缓冲液进行阳离子交换层析，得到含活性成分的洗脱液A；所述的含眼镜蛇毒的磷酸缓冲液包括眼镜蛇毒和磷酸缓冲液；

(2)将含活性成分的洗脱液A进行复合模式层析，得到含活性成分的洗脱液B；

(3)将含活性成分的洗脱液B脱盐，得到活性成分。

2.一种眼镜蛇毒的纯化方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)将含眼镜蛇毒的磷酸缓冲液进行阳离子交换层析，得到含活性成分的洗脱液A；所述的含眼镜蛇毒的磷酸缓冲液包括眼镜蛇毒和磷酸缓冲液；所述的阳离子交换层析的填料的功能基团为磺丙基；

(2)将含活性成分的洗脱液A进行高效反相层析，得到活性成分；所述的高效反相层析使用梯度洗脱，所述的梯度洗脱的参数为：使用a％乙腈水溶液→b％乙腈水溶液洗脱；a为0～10，b为20～40。

3.一种眼镜蛇毒神经毒素，其按照权利要求1或2所述的纯化方法制得。

4.如权利要求3所述的眼镜蛇毒神经毒素，其特征在于，神经毒素的含量大于98％；

和/或，最大单杂的含量≤1.5％。

5.如权利要求4所述的眼镜蛇毒神经毒素，其特征在于，神经毒素的含量为98.2％～98.7％；

和/或，杂质1的含量≤1.5％，例如0.1％、0.3％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％；所述的杂质1在下述分析条件下相对于神经毒素的保留时间为1.090～1.1125，例如1.109、1.113、1.115、1.117或1.120：

色谱柱：sepax bio-C18，4.6*150mm，5μm，

流动相A：0.05M磷酸三钠水溶液，其使用TFA调整pH至2.0

流动相B：0.1％TFA乙腈溶液，流速：1ml/min，波长：280nm，柱温：40℃，进样量：20μl

梯度：按下表A记载的参数梯度洗脱，Post time:5min；

表A

和/或，杂质2的含量≤1.0％，例如0％、0.40％、0.55％、0.60％或0.7％；所述的杂质2在下述分析条件下相对于神经毒素的保留时间为0.969～0.974，例如0.971、0.972或0.973：

色谱柱：sepax bio-C18，4.6*150mm，5μm，

流动相A：0.05M磷酸三钠水溶液，其用TFA调整pH至2.0；

流动相B：0.1％TFA乙腈溶液，流速：1ml/min，波长：280nm，柱温：40℃，进样量：20μl

梯度：按下表A记载的参数梯度洗脱，Post time:5min；

表A

6.一种眼镜蛇毒神经毒素，其特征在于，神经毒素的含量大于98％。

7.如权利要求5所述的眼镜蛇毒神经毒素，其特征在于，神经毒素的含量为98.2％～98.7％；

和/或，所述的杂质的含量和种类如权利要求4或5所述。

8.一种药物组合物，其包括如权利要求1～7中任一项所述的神经毒素和药用辅料。

9.一种眼镜蛇毒杂质1或2，其参数如权利要求5所述。

10.一种神经毒素的纯度分析方法，其参数如下：

色谱柱：sepax bio-C18，4.6*150mm，5μm，

流动相A：0.05M磷酸三钠水溶液，其用TFA调整pH至2.0；

流动相B：0.1％TFA乙腈溶液，流速：1ml/min，波长：280nm，柱温：40℃，进样量：20μl

梯度：按下表A记载的参数梯度洗脱，Post time:5min；

表A