[发明专利]一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒，包括抗体稀释液和酶标二抗，所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：75～95％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～8％的牛血清白蛋白、0.01～0.5％的硫柳汞钠、0.05～5％的抗凝剂、0.1～15％的非常规性饲养动物血清以及0.05～2％的青链霉素双抗；所述酶标二抗的稀释度为1：(500‑10000)。本发明还公开了一种间接酶联免疫抗体检测方法。本发明能降低普通酶联免疫检测方法的阴性背景，提高检测方法的信噪比和检测方法的灵敏度。

技术领域

本发明涉及生物检测试剂技术领域，更具体地说，涉及一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒及检测方法。

背景技术

酶联免疫吸附测定(ELISA)方法广泛用于测定抗体和抗原，其原理利用蛋白质或多肽与固体表面如ELISA板高度结合的亲合力。在用于血清学抗体测定的间接ELISA系统中，由于血清免疫球蛋白对固体表面的固有高结合亲和力，这种亲合力比任何目前使用的阻断剂高得多，此外，血清样品中的总体免疫球蛋白浓度高，为mg/ml，而抗原特异性抗体免疫球蛋白的浓度很低，为ng或μg/ml，非抗体免疫球蛋白会与抗原分子引起显著的非特异性相互作用。这些因素均会导致ELISA产生强烈的假阳性背景(BG)噪声反应。这种BG噪声反应始终是酶联免疫吸附测定方法所面临的技术瓶颈，一直以来该方法导致了众多不确定的结论和误解，为了防止进一步误用ELISA技术和误解血清学抗体测定数据，重要的是重新考虑免疫测定系统的原理和所有类型的非特异性反应。

在ELISA检测中，影响检测灵敏度的最主要因素是信噪比，即方法中阳性对照与阴性对照的比值。为了提高灵敏度，可以通过增强抗原与抗体结合能力，对信号进行放大，对背景(噪音)进行降低等方法。现有检测方法中存在检测背景偏高，即建立的检测方法的敏感性过低，检测时间过长等问题。

发明内容

针对现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒，降低检测方法噪声，提高信噪比，增加检测灵敏度，提升检测试剂盒的性能。

本发明的另一目的在于提供一种间接酶联免疫抗体检测方法；降低普通酶联免疫检测方法的阴性背景，提高检测方法的信噪比和检测方法的灵敏度。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒，其特征在于，包括抗体稀释液和酶标二抗，所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：75～95％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～8％的牛血清白蛋白、0.01～0.5％的硫柳汞钠、0.05～5％的抗凝剂、0.1～15％的非常规性饲养动物血清以及0.05～2％的青链霉素双抗；所述酶标二抗的稀释度为1：(500-10000)。

作为进一步的方案，本发明所述的酶标二抗为HRP过氧化氢酶或ALP碱性磷酸酶标记的羊抗猪、羊抗兔、羊抗鼠、兔抗猪、兔抗鼠中的一种。

作为进一步的方案，本发明所述的抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：85～92％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～5％的牛血清白蛋白、0.1～0.3％的硫柳汞钠、0.1～2％的抗凝剂、3～8％的非常规性饲养动物血清以及0.1～1％的青链霉素双抗。

作为进一步的方案，本发明所述的抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：91％作为溶剂体系的pH7.2的1×PBS缓冲液、2.0％的牛血清白蛋白、0.2％的硫柳汞钠、1.0％的抗凝剂、5.0％的非常规性饲养动物血清以及0.8％的青链霉素双抗。

作为进一步的方案，本发明所述的抗凝剂为肝素或乙二胺四乙酸二钠；所述非常规性饲养动物血清为骆驼、驼鹿、羊驼、马、鸵鸟、鸽、牦牛等动物血清中的一种或两种混合。