[发明专利]一种用超声波与沉淀结合法提取猪小肠粘膜中的肝素钠方法

说明书

一种能够从猪小肠粘膜中提取肝素钠的方法，它先使用树脂将猪小肠粘膜中的肝素钠吸附出来，再使用超声波对其进一步提纯，经过吸附、洗涤与洗脱、超声、沉淀四个步骤从猪小肠粘膜中提取肝素钠。结果此法与传统提取方法相比较，需要乙醇量少，效价和收率都有明显提高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，属于从猪小肠粘膜中提取肝素钠的方法。

背景技术

肝素钠是一种生化药品，其从猪小肠粘膜中提取，其在手术中起着不可替代的作用，挽救了无数生命，是医界不能断档药品。

自上个世纪四十年代以来，肝素钠被用于临床，应用范围不断扩大。特别自上个世纪九十年开始，在临床中肝素钠被广泛用于：防治血栓栓塞性疾病，辅助治疗尿毒症，心血管病，血液病等大量疾病。进入七十年代以后，肝素钠生产工艺，在我国得到不断改进提高，使我国成为最大的肝素钠产销国家，目前国际市场上70%以上肝素钠产品出产于中国。目前，肝素钠生产厂家主要采用盐解——离子交换——乙醇沉淀法从猪小肠粘膜中提取肝素钠粗品，该方法成本高，收率和效价低。所以，本公司开发了超声波与沉淀结合法猪小肠粘膜中提取肝素钠粗品，以降低成本，提高效益。

发明内容

本发明提供了一种全新的超声波与沉淀结合法提取猪小肠粘膜中的肝素钠，能够有效地降低成本，并提高肝素钠粗品的收率和效价。

为此，本发明通过以下技术方案予以实现：

1、吸附

称取一定质量的猪小肠黏膜，置反应罐中，加1倍质量的纯化水稀释，用30％的氢氧化钠溶液调节pH 值至9.0～9.5，加热至沸腾，保持10～15分钟，同时捞去液体上的杂物。缓慢降温至35 ℃～45 ℃，用在出水口处系有一100目尼龙布袋的耐高温的塑料软管将液体虹吸至反应池中，调节食盐波美度为3.2～3.5，PH值为8.0，按反应池中液体量加入6％的D204肝素钠专用树脂，保温搅拌吸附8～10小时。

2、洗涤与洗脱

吸附完毕后，静置30分钟，过滤，收集树脂，并用纯化水将树脂漂洗干净，沥干，加入1.2mol/L 氯化钠溶液洗涤2小时，沥干后，加入4 mol/L 氯化钠溶液1倍量，搅拌洗脱5小时，沥干后再洗脱2次，每次加入4 mol/L 氯化钠溶液的量减半，洗脱时间分别为2小时和1小时。合并全部洗脱液。

3、超声

将频率可调超声波发生器的频率调节至45000～47000赫兹后，对上一步的洗脱液使用超声波手段处理，用双层纱布过滤后，再用超声波二次处理使杂蛋白分离。

4、沉淀

按比例在滤液中加入1.5倍95％的乙醇，充分搅拌后，静置12小时以上，虹吸上层乙醇，沉淀物分别用95％的乙醇、丙酮脱水2次，真空干燥，得肝素钠粗品。

本发明的有益效果是：在乙醇沉淀之前，先用超声波进行处理。有效地降低了乙醇的使用量，并且提高了效价与收率。

四、具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

（一）实施例一：

1、吸附

称取50.0千克的猪小肠黏膜，置于反应罐中，加纯化水50.0千克，用30％的氢氧化钠溶液调节pH 值至9.3，加热至沸腾，保持14分钟，同时捞去液体上的杂物。缓慢降温至37 ℃，用在出水口处系有一100目尼龙布袋的耐高温的塑料软管将液体虹吸至反应池中，调节氯化钠波美度为3.3，PH值为8.0，按反应池中液体量加入6％的D204肝素钠专用树脂，保温搅拌吸附9小时22分钟。

2、洗涤与洗脱