[发明专利]一种对硝基苄醇丙二酸单酯的生物制备方法有效
| 申请号： | 201711326065.5 | 申请日： | 2017-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN108060186B | 公开（公告）日： | 2020-08-28 |
| 发明（设计）人： | 杨仲毅;钟永军;何昕蔚;罗希;蒋晶晶;余达勇 | 申请（专利权）人： | 台州学院 |
| 主分类号： | C12P13/00 | 分类号： | C12P13/00 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 贾师英 |
| 地址： | 318000 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 硝基 苄醇丙二酸单酯 生物 制备 方法 | ||
1.一种制备对硝基苄醇丙二酸单酯的方法，包括如下步骤：
以2-氰基乙酸-(4-硝基苯基)甲酯为底物，用腈水解酶或者其表达微生物、和酰胺酶或者其表达微生物进行联合催化而得，所述腈水解酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1，所述酰胺酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微生物是大肠杆菌。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤为：以2-氰基乙酸-(4-硝基苯基)甲酯为底物，用表达腈水解酶SEQ ID NO:1的大肠杆菌和表达酰胺酶SEQ ID NO:2的大肠杆菌进行联合催化而得。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，反应体系为pH 3.0～8.0的缓冲溶液体系，其中缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液、KH2PO4/K2HPO4缓冲液或者乙酸钠缓冲液。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，反应体系中添加有底物助溶剂，所述底物助溶剂选自甲醇、乙醇、二甲基亚砜、乙酸乙酯、丙酮、丁酮、正已烷、正戊烷、环已烷或者它们两种以上的混合物。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，反应体系中底物2-氰基乙酸-(4-硝基苯基)甲酯的加入量为0.5～100g/L。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，反应体系中底物的加入量为5～60g/L。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，反应体系中底物是一次性加入或者分批加入。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，反应体系的反应温度为20～40℃。
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