[发明专利]一种基于ABPP的人参皂苷Rg3活性分子探针及合成与应用

权利要求书

1.一种基于ABPP的人参皂苷Rg3的活性分子探针，其特征在于，具有式Ⅰ所示的结构：

式Ⅰ中，最右侧端连接的基团为炔基，其作为活性分子探针中的报告基团。

2.一种权利要求1所述的基于ABPP的抗肿瘤药物人参皂苷Rg3活性分子探针的合成方法，路线如下：

3.按照权利要求所述的合成方法，具体步骤包括：

1)羟基的保护：将20(R)-人参皂苷Rg3溶于有机溶剂，制得20(R)-人参皂苷Rg3溶液；加入酰化试剂，进行酯化反应，反应温度为80-100℃，反应时间约2-4h；然后加入无水乙醇淬灭反应，调节混合溶液的pH值为7～8，过滤，蒸馏,干燥；有机溶剂为三乙胺或者无水吡啶中的一种或二种，优选为无水吡啶；酰化试剂为乙酰氯或者乙酸酐中的一种或二种；

2)双键氧化断裂为醛基：步骤1)中得到的中间产物溶于体积比1:1的二氯甲烷和醋酸溶液中，-70～-90℃通入O₃，直到反应变蓝，然后通入O₂除去过量O₃，再通入N₂除去多余O₂，之后在上述溶液中加入足量锌粉(2～3g)，逐渐升温至室温并搅拌10～15h，用碳酸钾溶液(质量浓度50％～80％)调节pH值到7～8，二氯甲烷萃取浓缩；

3)亲和加成：在丙炔1～3MPa压力下，将其用活塞泵加入到2)中得到的中间产物的溶液中，氢氧化钾(10mmol)条件催化，反应温度维持在100～125℃，反应液经气液分离器分离，过剩的丙炔循环使用，然后进行蒸馏；

4)保护基的去保护：待3)中得到的中间产物完全干燥后，在无水DMF环境中，加入去乙基试剂TMSBr去掉羟基上的保护基，得到粗品，干燥，得产物。

4.一种权利要求1所述的基于ABPP的人参皂苷Rg3活性分子探针在制备抗肿瘤药物中的应用。

5.一种基于ABPP的人参皂苷Rg3活性分子探针的应用，其特征在于：当探针在活细胞中标记完成后，与母体化合物Rg3具有相同结构的部分作为反应基团，能够选择性地与细胞内蛋白质组中某一类酶的活性中心结合，并与其中执行重要催化功能的亲和性氨基酸发生反应，从而将探针分子共价的标记在靶蛋白上；之后可通过点击化学(铜催化的叠氮-炔基环加成反应)生物正交反应在探针上连接荧光基团或者生物素基团；

当连接荧光基团时，被探针分子标记的蛋白质组可通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离并显示出特定的荧光信号；

当连接生物素基团时，被标记的蛋白可通过亲和素被特异性富集出来，然后通过生物大分子质谱进行分析，进而确定这些被标记的蛋白成分。