[发明专利]一株产单细胞油脂的隐球菌及粗甘油培养产油脂的方法

权利要求书

1.一株产单细胞油脂的隐球菌，其特征在于，该菌株为隐球菌（Cryptococcus curvatus）WZUC01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCC NO.8096。

2.权利要求1所述的产单细胞油脂的隐球菌的应用，其特征在于，隐球菌WZUC01所产的单细胞油脂用于生产生物柴油。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，以处理后的生物柴油副产品粗甘油培养隐球菌WZUC01产单细胞油脂，包括如下步骤：

1）将保藏菌株Cryptococcus curvatus WZUC01接种于种子培养基中培养得活化菌液；

2）将步骤1）所得活化菌液接种于种子培养基中培养得种子；

3）将步骤2）所得种子接种于限氮发酵培养基中培养得含油脂的隐球菌；

其中，所述种子培养基含有粗甘油、酵母粉和蛋白胨；

所述限氮发酵培养基含有无机盐溶液、粗甘油和酵母粉，pH为5~6；

所述无机盐含有KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄、CaCl₂•2H₂O、FeCl₃•6H₂O、ZnSO₄•7H₂O和NH₄Cl。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述限氮发酵培养基中粗甘油的浓度小于90 g/L；C/N质量比为100以上。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述种子培养基组成为：粗甘油 20 g/L、酵母粉 20 g/L、蛋白胨20 g/L、pH 自然；

所述限氮发酵培养基组成为：无机盐溶液 10 ml/L、粗甘油30~60 g/L 、酵母粉0.75g/L，pH为5~6；

所述无机盐的组成为：NH₄Cl 25 g/L、KH₂PO₄ 350g/L、Na₂HPO₄ 100g/L、MgSO₄ 75g/L、CaCl₂•2H₂O 5g/L、FeCl₃•6H₂O 0.5g/L、ZnSO₄•7H₂O 0.5g/L。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤1）培养时间为48~72h，温度为30~35℃，在转速150~160 r/min下培养。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤1）所得活化菌以6~8 %的体积百分比接种于步骤2）的种子培养基中，培养时间32~48h，温度为30~35℃，在转速150~160 r/min下培养。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤2）所得种子以8~10 %的体积百分比接种于步骤3）的限氮发酵培养基中，在温度为30~35℃，氧饱和度大于30%下培养。

9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤3）每隔22~24h一次性补加30g/L粗甘油，粗甘油总补加量210g/L；培养72~96h一次性补加0.25g/L NH₄Cl和0.75g/L酵母粉。

10.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述粗甘油的制备方法为：将生物柴油副产品粗甘油与水以1:4的体积比混合后，调pH至6.5沉淀皂类， 4000 r/min下离心10 min去皂得粗甘油。