[发明专利]一种桔梗种子超低温保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种桔梗种子的超低温保存方法，属于种质资源保存的技术领域。

背景技术

桔梗别名包袱花、铃铛花、僧帽花，是多年生草本桔梗科植物，为药食两用品种，茎高20～120厘米，通常无毛，偶密被短毛，不分枝，极少上部分枝。叶全部轮生，部分轮生至全部互生，无柄或有极短的柄，叶片卵形，卵状椭圆形至披针形，长2～7厘米，宽0.5～3.5厘米，基部宽楔形至圆钝，急尖，上面无毛而绿色，下面常无毛而有白粉，有时脉上有短毛或瘤突状毛，边顶端缘具细锯齿。花单朵顶生，或数朵集成假总状花序，或有花序分枝而集成圆锥花序；花萼钟状五裂片，被白粉，裂片三角形，或狭三角形，有时齿状；花冠大，长1.5～4.0厘米，蓝色、紫色或白色。蒴果球状，或球状倒圆锥形，或倒卵状，长1～2.5厘米，直径约1厘米。花期7～9月。花暗蓝色或暗紫白色，可作观赏花卉；其根可入药，有止咳祛痰、宣肺、排脓等作用，中医常用药，人工栽培对桔梗种子的需求量很大。

目前种质资源保存方式为常温、低温保存中药材种子两种方式。常温保存中药材种子，每保存5年就需要重新繁种更新，因为中药材种子经过5年的保存，活力降低很快，只有50％左右；低温保存中药材种子，在中国，建立了国家中期库和国家作物种质库，国家中期库保存的温度为4℃左右，相对湿度小于65％，一般设计贮藏种子的寿命为5～10年，国家种质库为种质长期保存库，库中的温度为‐18℃左右，相对湿度小于50％，设计贮藏寿命达20年以上，也就是说种质在长期库中保存，活力同样随着时间的推移降低，种质20年后一般需要更新繁种，不是永久的保存。

因此，为了安全保存桔梗种质资源，研究探索一种安全而长久保存桔梗种质资源的方法很有意义，它能够减少或者避免种子更新繁种，省时省力，阻断繁种更新的过程中种质间基因漂移等产生种质变异，保证种质的遗传稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种适合于桔梗种子的超低温保存法，该方法能够补充现在桔梗种质资源保存技术的不足，可以长期安全的保存桔梗种质资源，为桔梗种质资源保存提供一条新的有效的技术途径。

本发明的目的是提供一种桔梗种子超低温保存方法，包括步骤以下：

(1)室温下将桔梗种子用A试剂处理，处理20～60min后，取出处理过的桔梗种子；

(2)处理过的桔梗种子放入装有B试剂的冻存管中，室温温育10～30min，再将其放入梯度降温盒中；

(3)将带有桔梗种子的梯度降温盒放入低温冰箱中，使其降温盒的温度在‐35℃～‐55℃，降温速度为‐1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存备用。

在一个具体方案中，步骤(1)中所述A试剂是指B5液体培养液，还包含有1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亚砜。

所述A试剂优选110～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。

在一个具体方案中，步骤(2)中所述梯度降温盒中含有100％异丙醇或甘油，可以重复使用。

在一个具体方案中，步骤(2)中所述B试剂是指B5液体培养液，还包含有2.8～3.8mol/L甘油、1.6～2mol/L二甲基亚砜和0.45～0.6mol/L蔗糖。

所述B试剂优选110～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。

在一个具体方案中，步骤(3)中所述低温冰箱的温度要求一般在‐70℃以下。

上述所保存的桔梗种子进行解冻时，若室温超过20℃，将冻存管从液氮中取出，直接利用室温自然解冻；若室温低于20℃，将冻存管从液氮中取出，并置于20～24℃水浴箱中解冻。解冻完后，取出冻存管中桔梗种子，用丙酮浸泡10～30min，再用自来水或者蒸馏水洗涤3～5次，清洗后桔梗种子直接用于培养。

技术效果

1、本发明提供的超低温保存桔梗种子方法具有工艺简单、稳定性可靠、保存后种子发芽率和鲜种的发芽率无显著性差异。

2、本发明具有长期、有效、安全保存桔梗种子，是桔梗种质资源长期保存的最有效方法。

具体实施方式

下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任何一个或类似实例。

实施例1